1、第六节 组织的冲洗(洗涤)用水或乙醇 等将组织经过固定处理后,未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程,称为洗涤。1. 洗涤的目的洗涤的目的使为了去掉未与组织结合的固定液及沉淀物。组织脱水前需要用流水冲洗笃定后的组织块(使用特殊固定液除外) ,避免组织中留有较多的固定液而妨碍脱水,甚至在组织中生成沉淀物或结晶而影响染色和观察。对陈旧性标本应注意,一定要用流水彻底冲洗,尽可能降低组织的酸性程度,并减少甲醛色素。对使用混合固定液固定的组织更应及时冲洗,不可搁置太久,以有利于后续各程序的进行。2. 洗涤的方法(1)含水 固定液的洗涤方法 常用的含水固定液是甲醛溶液,用自来水冲洗即可。冲洗时将组织块放
2、入广口瓶中,瓶口罩纱布并用线系牢,置于接有橡皮管的自来水龙头下,橡皮管的另一端插入瓶内,让水从瓶底向上缓慢流出而更新。水洗时水流速度不能快,以免冲坏组织的完整性。水洗时间取决于标本种类、组织块大小、固定时间等。尸检组织、大块组织水洗时间约为 4h,小块组织冲洗时间为 24h。固定时间短的新鲜标本,可缩短水洗时间。固定时间较长的组织,则需要长时间流水冲洗。对穿刺组织、脑等细小易碎的组织,为不损坏组织,以浸泡方式洗涤为宜,浸泡时应反复多次换水,浸泡时间应根据具体情况而定。(2)含乙醇固定液的洗涤方法 用乙醇或乙醇混合液固定的组织,一般不需要洗涤。如果需要洗涤,应使用与固定液中的乙醇浓度相近或略低的
3、乙醇洗涤,不可用浓度相差太大的乙醇冲洗,也不能直接用水冲洗。(3)特殊固定液的洗涤方法 使用的固定液不同,洗涤的方法也不一样。铬酸、锇酸固定液,用流水冲洗 1224h,应注意洗涤干净,否则也影响染色。重铬酸钾固定液,用流水冲洗 1224h,或用亚硫酸钠溶液冲洗,也可用 1的氨水溶液洗涤。苦味酸固定液,无论是乙醇溶液或水溶液,都应用流水彻底冲洗,并用 50或 70乙醇浸洗,以洗掉组织内苦味酸所留的黄色。浸洗时可将少量碳酸锂饱和水溶液滴入乙醇中,直至乙醇不变色为止。氯化汞固定液,含氯化汞固定液固定的组织,常常形成菱形结晶(氯化亚汞)或不规则的物质(金属汞) ,使组织变脆,影响制片和染色质量,因此,
4、必须进行脱汞处理,以除去含汞的沉淀物。具体方法:组织用自来水冲洗后放入 70或 80的乙醇中洗涤,洗涤时滴入 0.5碘酒(用 70乙醇配制) ,待棕色消失后继续冲洗,直至脱汞乙醇无色。最后用5硫代硫酸钠水溶液脱碘。组织经过固定后,脱水之前应进行冲洗,将组织内的固定液洗干净,否则残留组织内的固定液有碍制片和染色,而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作用,以至于损坏组织,给制片工作带来不利。在冲洗时,冲洗剂的选择应依固定液的种类和性质而有所不同。冲洗时应注意以下事项:1. 水溶性的固定剂:需用流水冲洗。2. 酒精溶剂的固定剂:应用同浓度的酒精浸洗。3. 含苦味酸的固定剂:(苦味酸与甲醛混合液除外) ,须用 70酒精浸洗,以免水洗后固定作用消失。4. 含有升汞固定剂:组织经固定后应在冲洗剂水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。5. 含有铬酸的固定剂:组织在冲洗时最好置于暗处,以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。