1、实验八 血液葡萄糖的测定 （福林-吴宪氏法）,一、实验目的,1、掌握采用福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的原理。 2、熟悉分光光度计的使用。,二、实验原理,磷钼酸,钼蓝 （蓝色）,C6H12O6 +2Cu(OH)2,C5H11O5COOH +Cu 2O ,3Cu 2O +3H3PO42MoO3 12H2O,6CuO +3H3PO4Mo2O3 12H2O,Na2CO3H2ONaOH+NaHCO3 NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+ Na2 SO4,碱性铜试剂,钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。血糖
2、管的使用：血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。,三、实验步骤,1、全血无蛋白滤液的制备,抗凝血1ml,蒸馏水7ml,混匀,1/3mol/L硫酸1ml,振摇,10%钨酸纳1ml,振摇,过滤,放置5min,无蛋白血滤液,2、按表操作,混匀，置沸水浴中煮8min。取出用流动自来水冷却3min,无蛋白血滤液,蒸馏水,标准葡萄糖应用液,碱性铜试剂,空白管,标准管,测定管,1.0,2.0,1.0,1.0,-,-,-,1.0,-,2.0,2.0,2.0,血糖管,试剂ml,磷钼酸试剂,2.0,2.0,2.0,1：4磷钼酸溶液加至,混匀后放置2min,25,25,25
3、,3、比色测定,将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在420nm处测定吸收度。,四、操作注意,1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确8分钟。 2、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。 3、加入磷钼酸后迅速比色。 4、分光光度计的使用。,五、结果计算,测定管吸收度,标准管吸收度,葡萄糖mg/100ml =,0.1 ,100,0.1,六、分析讨论,分光光度计的使用,1、接通电源，打开比色皿盖，预热20-30分钟后，调节波长至所需波长。 2、将盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放测定溶液。将比色皿盖盖上，此时空白溶液在光路上。将光点调到“T”，调节 T为100%。 3、将光点调到“A”，轻轻拉动比色架固定拉杆，使第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液的吸收度。 4、依次拉出第三、第四个比色皿，分别读取吸收度。 5、测定完毕，先打开比色皿盖，再断电源。,
