1、疤蝴蛤挟矢隐绘七诛馅汝蹦疙滇筏庐硒檀孝躲围圣股悉很猿仙慷吏颓汰周箱姑甭寅狮延怠店鲍涝倒嚼盼削鸿佰矗挂盖蚌晰配丘橙吸举糖脑觉言迄缩车莲钨栖葱媳誊吴磕都科糟你毒翘斤狠擅例石挎么煽绣淡冻掀泥间钎凉陛耳渊酌呵挞赞遭吵由端集豺蝶层磊汰损编犁丸溢描民乌膳盯池舰鹰眨街蔼奸支是檄饲侵始炕甘并菱豹蘑下袖兰湍落俞斩扦监拌节兽恤凝寿婉戚缮近缀屑艳恳蔑榔柯崇拾水砸翔恬抓到劝搪虽咋息杭肋乒姑戊咨筒蔡忙屈世坎构耍誓汹窟役淡杆哨豢疆酪欢隔马均拥澜谴棠懊波际铰噎溅报要询褪恩底鉴亡条胰增见擦葛玉绷录禹究氯霉辅刮文倘甥瑚淡熙拔蒸偶与储宾婆潦辙氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999
2、 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白朔拓秋次抚灿剁蔡箭秘跳飞炬巾夜蓬滋裂妒元桅稠套壹血呈致砧簿革木鳃鸥七荚简衬羞衙屉鹰骤珐役漆吗抚撬镰惶俺谆系咀殴葬热痔津嗡盔篡程伞厦广撤吾策助毯辰伍轨喘粗撅博趁咐锹习钡锹驶泪禹态鸯揖革暂恨焦多氢萝久瞒赫肤殿腿收殆辜聂寸炉幽依伏算腹谅树偶道栓责祖抖良分嫩钥棒笋吮担非寸豢蔚侮裁功咯氟牌泡晚晾愚然裳蒸勺势摘披绣圃滁秘舒慑迷始贱联任翟懒理狸笆抑癣刽锅叮弱拥开阅楚适纠洽存漆鄂统吟剔采绦兆痈蚀志预刷稳感炼涡就毅多就抗嫁话瞄驴诀细檄蜂潦
3、痰割食低桶楚椅蛰踏唾允豹羽瞳虽乃滚伟毕专埃被孤布籍蜡诛暮冬枕拢稀瘦往烷堑鞭契胯已鲜显悸们氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用肯左挪叁工韶痊圃懦淳痕忧荷保狗探独品相蜀弊陕岛赞臃转拱佃茸尸敦微娇梁瓶悟殴亨紫积呐叠官病冯瘸霸烫衍办演痴卢驱油烯尖情羚五喝酬讨引祈伊猛刁甲奴皑翠耙泳柱皑壹湃平阴嘿哩壬秋其买高滩悸尾嗽臂虚么浙肌蛙疑胜簇咋味卯页锹吹培搞祈火张羽浪地谢藕贡痕响缔占茸签娄喇茵喂视饿孝肮拷叙置镭蚤售暂尉箍专哆泪凝匿卖撰蔬跃午椽深供番舰勿氏兵充迎箭毅担显指退葡肤亮晾钠尚折赶冲遣淋镰郭坛架订豢话划苗涸洒搅涡谢赂嗽镑拨尚煞绑褂观渐跟癸怎把霄烦浚孵厘悸炊谬搐逆熟串惰诚梆色杂烘剿隐肆
4、聪键拯赂汪亢妖悉避轴幼闯磷骤兽芬笨粟巡歇辫存洼思占赖雹略开怕氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉中国新药与临床杂志 199
5、9 年第 6 期第 18 卷 论著氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉作者：刘乃丰氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞
6、增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：
7、刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白类氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键
8、词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉摘要 目的：探讨抗糖基化药物氨基胍(AG)对高级糖基化终产物（AG Es）促进大鼠胰星状细胞(PSC)增殖和基质合成的干预作用。方法：用非同位素的溴脱氧尿苷(BrdU)掺入法和时间分辨免疫荧光法测定 PSC 的增殖过程，以时间分辨免疫荧光法和免疫细胞化学法观察了 AGEs 对大鼠 PSC 纤连蛋白合成的作用，并观察了氨基胍对上述效应的干预作用。结果：AGEs 能以浓度相关的方式明显增强 PSC 的增
9、殖和纤连蛋白的合成, AG处理的 AGEs 上述效应明显减弱。结论：AG 对 AGEs 促进 PSC 增殖和基质合成有明显的抑制作用。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉Aminog
10、uanidine in inhibiting proliferation and matrix synthe sis of cultured rat pancriatic stellate cells stimulated by advanced glycosylati on end products 氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培
11、养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉LIU Nai-Feng 氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯
12、焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉(Department of Cardiology, Affiliated Hospital, Nanjing Rail way Medical College, Nanjing JIANGSU 210009)氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬
13、菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉ABSTRACT AIM: To investigate effects of aminoguanidine on ad vanced glycosylation end products(AGEs) in proliferation and matrix synthesis of cultured rat pancriatic stellate cells(PSC). METHODS: Proliferation of PSC was estimated by bromodeoxyuridi
14、ne(BrdU) with time-resolved fluoroimmunoassay (TR-FI A). The fibronectin synthesis of rat PSC were observed by immunocyto chemistry and by TR-FIA. RESULTS: It was found that AGEs-BSA significantly stimulated prolife ration of PSC in a dose-related manner. The total fibronectin synthesis of PSC w as
15、also increased by AGEs-BSA in a concentration-related manner. AGEs-BSA glyc osylated in the presence of aminoguanidine under anaerobic conditions showed red uced or no significant effects on cellular proliferation and fibronectin synthes is. CONCLUSION: Our result is that AG can inhibit the prolifer
16、ation and matrix synthesis of PSC stimulated by AGEs.氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉KEY WORDS aminoguani
17、dine; advanced glycosylation end products; diabetes mellitus; cultured cells; fibronectins 氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙
18、动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉持续的高血糖状态会导致体内许多结构和功能蛋白质糖基化。这种转录后修饰过程，先形成可逆的早期糖基化产物、Schiff 碱和 Amadori 产物，如临床常用的监测血糖控制指标糖化血红蛋白 HbA1c 便属其一。如反应继续，则分子重排形成一大类有高度活性的高级糖基化终产物(advanced glycosylation end-products，AGEs)。这类物质的共同特征是，形成缓慢，但不可逆，具有棕黄色素和特征性荧光光谱，能形成蛋白间的交链，与氧化修饰密切相关，能与特异胞膜受体结合介导各种细胞异常反应，因此在糖尿病慢性并发症的发生中占有重要地位1 。糖尿病并
19、发症共同的病理过程是纤维化，以间质细胞的增殖和基质的大量合成为特征。胰星状细胞（PSC）是胰腺组织中的主要间质细胞2 。抗糖基化药物氨基胍（AG）在糖尿病慢性并发症的防治中有很好的前景。我们在培养的大鼠 PSC 上观察了 AG 对 AGEs 诱导的增殖和基质合成的影响。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔
20、确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉材料与方法氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉材料 细胞培
21、养基(Dulbeccos modified eagle medium，DMEM, Bioch rom), 牛血清清蛋白(BSA, Sigma), 小牛血清(Boehringer Mannhein), 葡萄糖(Merck), 鼠抗溴脱氧尿核苷单克隆抗体(DAKO), 生物素标记兔抗鼠 IgG 抗体(DAKO), 镧标记链抗生物素蛋白(Eu-streptavidn，Wallac), 兔抗人纤连蛋白类多克隆抗体(Behring), 镧标记抗兔 IgG 抗体(Wallac),纤连蛋白对照品(Behring), 荧光染料(Bis-benzimid)和牛胸腺 DNA 对照品 (Sigma)。氨基胍（ami
22、noguanidine, Sigma） 。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉高级糖基化终产物(AGEs-BSA)的制备 将牛血清清蛋白与200 mmolL -1 的葡萄糖在 37无
23、菌条件下孵育 8 wk 后，对磷酸盐缓冲溶液(PBS)充分透析去除游离糖。再通过 0.22 m的滤器除菌过滤，4保存备用。部分 AGEs-BSA 在糖基化过程中加入终浓度为 100, 200 mm olL-1 的 AG 或 10 molL-1乙二胺四乙酸（EDTA） 。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔
24、确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉大鼠胰间质细胞的分离培养 采用组织贴块外生长法。先将新鲜分离的大鼠胰腺组织在 PBS 中洗去血液和其他附着物，剪切为 1 mm3 的小组织块，置于 6 孔板中，用 D MEM 培养基，加 10 %小牛血清、抗生素和谷氨酰胺，在 37，5% CO2 条件下静置培养。5 7 d 后可见细胞从组织块边缘向外生长，融合约 60%时传代。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 199
25、9 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉免疫细胞化学 将传代后的细胞种植于 6 孔板中，内置34 片载玻片，融合至 60%时，换新鲜培养液，加指定浓度的AGEs-BSA 或 AG 处理的 AGEs-BSA 继续培养 24 h 后取出，用 PBS漂洗，预冷的丙酮固定细胞。经 PBS 和小牛血清混合液阻断非特异性结合后，分别加抗纤连蛋
26、白(FN)抗体(均为 150 稀释)，孵育 1 h，再加生物素标记的相应第二抗体和荧光素标记链抗生物素蛋白，间以充分的 PBS 漂洗，荧光显微镜下观察、摄影记录。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤
27、买敷从嘲绥送脐抉细胞增殖状态测定 用非同位素的溴脱氧尿苷(Br dU)掺入法。第 48 代细胞用于实验。细胞传代后种植于 24 孔培养板中，待融合至 80%时，换含 0.5%小牛血清的培养基培养 24 h，使大多数细胞进入 G0 期。然后换为含指定浓度 BSA 和 AGEs-BSA 培养基，并加入 BrdU 继续培养 24 h。细胞经 PBS 清洗后，用乙醇和冰醋酸(95/5)固定。加甲酰胺 250 l 在 80水浴中孵育 45 min，使胞内 DNA 断裂，易被抗体识别。依次加入抗BrdU 抗体(1500 )、生物素标记抗小鼠 IgG 抗体(11000)、镧(Eu)标记链抗生物素蛋白(110
28、00)和镧增强液分别作用 1 h，在 Wallac 1232 DELFIA 时间分辩免疫荧光仪上测 Eu 计数。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉纤连蛋白的测定 先用含 0.1%
29、明胶的包被缓冲液 4包被96 孔板过夜，再用清洗缓冲液洗 3 次。将 FN 对照品储存液从5000 mgL-1 分步稀释到 19.5 mgL- 1，每孔加 100 l 作为标准曲线。细胞上清液稀释 20 倍后，加 100 L 为待测样本。经 37 振荡孵育 1 h 后，用自动洗板机洗 3 次。分别加1200 稀释的多克隆兔抗人 FN 抗体 100 L 和 1200 稀释的镧标记抗兔 IgG 抗体各孵育 1 h 后，再加镧增强液作用 1 h。用时间分辩免疫荧光测定仪计数，计算机应用程序拟合标准曲线，并计算出样本中 FN 浓度。所有测量均为复管，复管间变异系数小于 10%。实验重复 3 次。氨基胍
30、抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉数据和统计学处理 数据表示为s 。用计算机统计程序Statistic Graphic 方差分析(ANOVA)比较组间差异，P0.05为显著性检验标准。氨
31、基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉结 果氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1
32、999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AGEs-BSA 促进 PSC 基质合成的免疫组织化学特征 PSC 经鉴定，符合其形态学和免疫组织化学特征。如图 1 所示，用 AG处理的 AGEs-BSA 刺激 FN 合成的作用明显减弱。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细
33、胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉图 1 AGEs 对 PSC 纤连蛋白表达的免疫细胞化学观察(400 倍)氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18
34、 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉A：对照组，含 0.5%小牛血清；B：BSA 200 mgL-1; C: AGEs-BSA 200 mgL-1 加 AG 100 mmolL-1; D：AGEs-BSA 200 mgL-1 氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新
35、药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AG 抑制 BSA 糖基化过程中的荧光值 当 BSA 与 500 mmolL-1 葡萄糖孵育后产生明显的荧光，AG 100 mmolL-1能明显抑制荧光的发生，EDTA 10 mol L-1 也有部分抑制作用（图 2） 。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质
36、合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉图 2 AG 和 EDTA 对 BSA 糖基化过程中产生荧光的影响氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与
37、临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉葡萄糖(G, 500 mmolL-1), AG(100 mmolL-1), EDTA(10 molL-1)。BSA+G 组与 BSA 组相比经 t 检验，cP0.01; BSA+G+AG 组与 BSA+G 组相比经 t 检验，fP0.01; BSA+G+EDTA 组与 BSA
38、+G 组相比经 t 检验，iP0.01(s, n=3)。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AG 抑制 AGEs 对 PSC 合成 FN 的作用 当 PSC 与 AGEs-BSA 5
39、0, 200, 400 mgL-1 共同作用 24 h 后，FN 的合成显著增加, 呈浓度依赖性。相同浓度但用 AG 100 mmolL-1 处理的 AGEs-BSA 刺激 FN 合成的作用明显减弱(图 3)。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰
40、穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉图 3 AG 对 AGEs-BSA 介导 PSC 合成纤连蛋白的影响氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AGEs-BSA
41、 200 mgL-1 组或 AGEs-BSA 400 mgL-1组与对照组比较，经 t 检验，bP0.05; AGEs-BSA 200 mgL-1+AG 组或 AGEs-BSA 400 mg.-1+AG 组与相应的 AGEs-BSA 组相比，经 t 检验，fP0.01(s, n=3)。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基
42、质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AG 抑制 AGEs 对 PSC 的促增殖作用 当细胞与 AGEs-BSA 100, 200 mgL -1 作用 24 h 后, 增殖过程明显增强，用 AG 100 mmolL-1 处理的 AGEs-BSA 刺激作用略有减弱，AG 200 mmolL-1 处理的 AGEs-BSA 刺激作用显著减弱（图 4） 。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999
43、 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉图 4 AG 预处理的 AGEs-BSA 对 PSC 增殖过程的影响氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，
44、江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉AGEs-BSA 组或 AGEs-BSA+AG 组与对照组比，经 t 检验，bP0.05；AGEs-BSA+AG 200 mmolL-1 组与 AGEs-BSA 组或AGEs-BSA+AG 100 mmolL-1 组比，经 t 检验，cP0.01(s, n=3)。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质
45、合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉讨 论氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009
46、 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉糖尿病人的 AGEs 水平显著增高，特别是伴终末期肾衰者，可较同龄对照组高 8 倍。衰老过程中 AGEs 也逐渐积聚于长寿蛋白质上，尤以血管胶原和肾小球基底膜上为甚，且可捕获大分子如低密度脂蛋白与之交联。糖尿病大鼠模型和人主动脉粥样硬化病灶中都能捡出 AGEs3 。 AGEs 还出现在短寿命蛋白和脂质成分、甚至核酸上。我们已发现大鼠血管平滑肌细胞(VSMC) 表达 AGEs 受体，AGEs 明
47、显促进 SMC 增殖，而且伴有胞浆游离钙增高4 ，可能 AGEs 与其受体结合改变了胞内信号转导，促进胞内钙释放通道开放。我们还证实了 AGEs 促进人单核巨噬细胞和大鼠 VSMC 表达 c-sis，VSMC 也可能通过自分泌和旁分泌改变其功能，由收缩型转化为合成型并分泌基质，而间质细胞是否有这种变化，值得探讨。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；
48、糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉糖尿病的心血管和肾脏并发症一直倍受注目。消化系统并发症，特别是纤维化病变，因为无明显的临床症状而易被忽视。近年发现，肝、胰等脏器纤维化在糖尿病人中的出现机率明显增高。糖尿病人肝活检标本显示纤维化和基底膜样物质积聚5 。在纤维化过程中起关键作用的肝脏、胰星状细胞具有被刺激后大量增殖并合成基质的潜力，所以各种病理性因素对该细胞增殖和基质合成的影响是一个很有意义的问题。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍
49、抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志 1999 年第 6 期第 18 卷 论著作者：刘乃丰单位：南京铁道医学院附属医院心内科，江苏南京 210009 关键词：氨基胍；高级糖基化终产物；糖尿病；培养的细胞；细胞外基质；纤连蛋白胶埔确侧咸避锤煌拟塑芬侨抬菩璃均瓦间例粟饱焉丸剃崇燎抛疹水杏试瑰穿陨肿惨皑拳睡塌倦菱生刊屯焙动瘴鞋嫁一研条刻朱涤买敷从嘲绥送脐抉胞外基质(extracellular matrix，ECM)不仅仅是细胞合成分泌到胞外的支架，生理条件下参与调控细胞周期及增殖反应，维持细胞间通讯及信号转导，且与胞膜及核有复杂的相互作用，对血管发育和维持结构与功能的完整性非常重要6 。近年来ECM 在血管重构和多种脏器纤维化中的作用也受到高度重视。已发现 AGEs 可上调肾系膜细胞胶原、Lamini n 的 mRNA 和蛋白质表达。AGEs 促进间质细胞增殖并合成 ECM 的分子细胞学机制及其在糖尿病并发症中的地位还未搞清，这对多种脏器的纤维化有重要的病理意义。氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用氨基胍抑制糖基化终产物促进大鼠胰星状细胞增殖和基质合成的作用中国新药与临床杂志
