1、14影本一班 张琛 201452623,血液实验,影响血液凝固的因素,实验目的：了解血液凝固的基本过程及影响血液凝固的一些因素实验原理：血液由流体状态变为不能流动的胶冻状凝块的过程称为血液凝固。本质是可溶性纤维蛋白原转换为不可溶性纤维蛋白多聚体。纤维蛋白交织成网，从而形成血凝块。血液凝固过程： 凝血酶原酶复合物形成凝血酶原 凝血酶纤维蛋白质 纤维蛋白,凝血酶原酶复合物的形成中有两个途径，内源性和外源性。内源性是指参与凝血的全部物质均在血液中。外源性是指在凝血的过程中有其他组织的凝血物质。Ca2+在血液凝固中的作用：FII、FVII、FIX、FX这四个因子的生化特征是分子上都有Ca2+ 结合的部
2、位，通过与Ca2+ 结合发生变构，暴露出与磷脂结合的部位来参与凝血。因此Ca2+在血凝过程中具有很重要的作用。血小板在凝血过程中的作用： (1)激活的血小板为凝血因子提供磷脂表面，参与内外源性凝血途径因子X和凝血酶原的激活； (2)血小板质膜表面结合有许多凝血因子，如纤维蛋白原、FV、FXI、FXIII，这些因子的相继激活可加速凝血过程； (3)血小板激活后，释放颗粒的内容物，如：颗粒内纤维蛋白原的释放，可增加纤维蛋白的形成，加固凝块。,肝素在凝血过程中的作用；肝素在体内和体外都有抗凝作用，主要通过增加抗凝血酶的活性而发挥间接抗凝作用，使血液不凝。温度对血液凝固的影响：适宜酶发挥效能的温度（3
3、7左右）环境中，血凝速度加快。接触面光滑程度对血液凝固的影响：接触面越粗糙血液凝固速度越快,实验材料动物： 家兔，23kg，雌雄均可 药品：20%乌拉坦溶液、肝素、草酸钾、0.025mol/L氯化钙溶液、肺组织浸液、富血小板血浆、少血小板血浆、生理盐水、石蜡油 器材：小烧杯、带橡皮刷的玻璃棒或竹签、清洁小试管9支、水浴装置一套、冰块、棉花、移液器（1ml、0.2ml）,实验方法1.观察内源性与外源性凝血的过程 取干净小试管3支，编号后按表7-2加入各种成分摇匀后静置，在加入0.025mol/LCaCl2溶液的同时开始计时，每15倾斜一次，观察是否开始凝血，并分别记录3支试管的血凝时间，比较3个
4、管的血液凝固时间。比较血液凝固的时间(1与2比，2与3比)，分析产生差别原因,2.观察影响血液凝固的理化因素 取小试管7支，编号并按表7-4准备后，取家兔颈动脉血，每管2ml立即计时，每15倾斜试管一次，以观察血液是否凝固，至血液呈凝胶状不再流动时记录血凝时间。,3.观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用 取血10ml，注入两个小烧杯中，一杯静置，另一杯用试管刷轻轻搅拌，几分钟后试管刷上结成红色血团，用水冲洗，观察纤维蛋白的形状，比较两杯的血凝情况。,注意事项1每试管口径大小及取血量应基本一致，判断试管倾斜角度（45）、间隔时间（30s/次）、标准（血液不见流动）都应一致。 2采血有先有后，计时不应
5、统一要求，各组和个人应分别单独计时。 3棉花不要压试管太紧，要松软。 4用石蜡油将试管表面全部润滑后，将石蜡油倒入水池中。 5取血前先准备好冰块，取完血后立即把第3号试管放入水浴锅，4号试管放入装有冰块的烧杯中。,出血时间和凝血时间的测定,实验目的：学习出血时间和凝血时间测定的方法实验原理：出血时间是指从针刺使毛细血管破损，血液自行流出到自行停止的时间。当毛细血管受损时，受伤血管可立即引起收缩反应，从而局部血流减慢，有利于血小板粘着并聚集于血管的破损处，形成松软止血栓 。接着部分血小板破裂，释放出血小板因子，在局部迅速出现血凝块，使出血停止。出血时间的测定可以反映毛细血管及血小板功能正常与否。
6、凝血时间是指血液流出体外至凝固所需要的时间。它反应的是血液本身的凝血过程是否正常。凝血时间的延长常见于一些凝血因子缺乏或异常的疾病。,实验材料对象：人药品 ：75%酒精棉球器材：采血针、载玻片、滤纸条、秒表,实验方法： 1出血时间的测定 (1)以75%酒精棉球消毒耳垂或中指指端腹侧，待酒精自然挥发后，用消毒采血针刺入上述部位23mm 深，让血液自然流出，切勿挤压，从血流流出算起计算时间。 (2)每隔半分钟用滤纸吸干流出的血流一次，直到吸不到血液为止。 (3)记录开始出血到止血的时间，或以滤纸上的血点数0.5分钟来计算，其结果即为出血时间（分）。,2凝血时间的测定 (1)以75%的酒精棉球消毒，
7、待酒精自然挥发后用消毒采血针刺入上述部位23mm深，让血液自然流 出，用棉球轻轻拭去第一滴血液，待血液重新自然流出即开始计时。 (2)将第二滴血置于玻片上，每隔半分钟用大头针挑血一次，直到挑起细纤维状的血丝，即表示开始凝血.从开始流出到挑起细纤维状的血丝所需要的时间即为凝血时间。,注意事项1各种用具严格消毒。 2针刺手指或耳垂不宜过浅，深度23mm使血可自然流出为宜。如针刺部位深度不够，流血量太少不能用力挤压局部，应重新针刺。 3用滤纸吸血时，注意不要用滤纸触及皮肤伤口，以免影响结果的准确性。 4测定凝血时，应严格每隔半分钟用大头针挑血一次，不可太频繁，同时每次挑动血液要按一定方向和顺序进行，
8、以免破坏纤维蛋白的网状结构而造成不凝的假象。,ABO血型的鉴定,实验目的： 学习ABO血型鉴定的实验方法，加深对ABO血型划分的理解实验原理： 是指红细胞膜上特异性抗原的类型。根据红细胞膜上是否有A或B抗原可分为四种血型：A型、B型、AB型和O型。当凝集原遇到与其相对抗的凝集素会发生凝集。根据抗原抗体反应原理，利用已知的血清凝集素(抗A凝集素、抗B凝集素)来确定未知的红细胞膜上的凝集原（A凝集原和B凝集原）的种类，从而鉴定ABO血型。,+,含B抗原的红细胞,抗B抗体,红细胞 凝集反应,抗B,血型的抗原和抗体分布情况,实验材料 对象：人 药品：抗A抗体和抗B抗体，生理盐水 器材：采血针、凹玻片、
9、75%酒精棉球、显微镜,实验方法1取双凹片一块，用蜡笔在两端分别写上A、B字 样，在两侧凹内分别滴一滴抗A抗体和抗B抗体。 2用镊子夹取75%酒精棉球，消毒指端或耳垂及采血针，用采血针采一滴血，用玻片一角刮取少许血液在抗A抗体中摇匀，在再用玻片另一角刮取少许在抗B抗体中摇匀。 3将玻片轻轻转动数次，使血液血清充分混合，放置1015min后肉眼观察有无凝集现象，若肉眼不能判断是否凝集，应放在显微镜下观察，鉴定结果。,Rh血型系统 人类红细胞含有一种与恒河猴的红细胞相同的凝集原称为Rh 因子 含Rh因子 Rh阳性 不含Rh因子Rh阴性输血原则 1当给人体输入血型不相容的血液时,在血管内会发生红细胞凝集反应,且在补体作用下, 凝集红细胞破裂,发生溶血反应,甚至危及生命.因此血型鉴定是安全输血的前提.2即使在ABO系统血型相同的人之间进行输血,输血前还必须进行交叉配血试验(cross-match test,注意事项1用于刮取血液的玻片的两角不能混用，否则会使 双凹片中A、B血清相混。 2注意区分红细胞凝集和聚集，后者加生理盐水可 分散，前者不能分开。 3判断红细胞是否凝集，要有一定时间(一般1015min)，尤其是室温低时，凝集所需的时间更长。 4一定用笔在双凹片两端写上A、B，以免血清弄混. 进行交叉配血试验时，应在37下进行，以保证可能的凝集反应充分显示。,
