1、柠檬中总酸度及 Vc 含量的测定(1)一、实验目的1. 学习定量维生素 C 的原理和方法2. 掌握微量滴定技术3. 学会直接法配制标准溶液的方法。4. 学会使用分析天平称取试样。5. 练习容量瓶、移液管、滴定管的操作方法。二、实验原理1. 用硼砂标定酸溶液的反应： 化学计量点时的 pH=5.27, 可选甲基红作批示剂。2. 硼砂标准溶液浓度计算：硼砂标准液浓度：0.38 /（382*0.25）= 0.00398（0.00399） M3.维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，
2、并具有对化学致癌物的阻断作用。4 维生素 C 是具有 L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。5.维生素 C 具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素 C 能将染料 2，6二氯酚靛酚还原成无色的还原型的 2，6二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢维生素 C。氧化型的 2，6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用 2，6二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C尚未全被氧化时，滴下的 2，6二氯酚
3、靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的 2，6二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时 2，6二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C 的含量。其化学反应式如下： oHOHOCC2OClClNOHO-NClO OHNClClOH2OCC O o+-26- HH-26-三、仪器、试剂（一）仪器：万分之一分析天平，25ml 酸碱滴定管各 1 支，20ml移液管 1 支，10ml 量筒 1 支，表面皿 1 个，250ml 锥形瓶 2 只，250ml 容量瓶 2 只，
4、250ml 烧杯，洗耳球 1 只，玻璃棒 1 根，移液管架 1 个，药匙 1 个，滴定台。天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、酸式滴定管、漏斗（二）材料、试剂1、柠檬2、1%草酸溶液1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中3、2%草酸溶液2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中4、标准维生素 C 溶液准确称取 20mg 纯维生素 C 粉状结晶于 1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中 10ml 稀释至 100ml，即得 0.02mg/ml 的维生素 C溶液。在使用前临时配制。5、0.02%2，6二氯酚靛酚溶液溶解 50mg2，6二氯酚靛酚于约 200ml 含有 52mg
5、的 NaHCO3的热水中，冷后稀释至 250ml，过滤，装于棕色瓶中。6.硼砂（分析纯，摩尔质量 381.37 或 382），甲基红指示剂（0.1%：0.1g 甲基红 20ml 乙醇 80ml 蒸馏水 混合 100ml 不够补乙醇至 100ml）四、实验步骤（一）试样处理： 取柠檬，需去皮、去柄、去核，切成块状，置于搅拌机中捣碎混匀并过滤。准确移取 25ml 柠檬汁，加 100mL 无 CO2 的蒸馏水，稀释定容为 250ml 溶液。然后倒入烧杯中在 7580水浴上加热 30 分钟。冷却后倒入容量瓶中备用。（二） 硼砂标准溶液的配制取一个洁净且干燥的表面皿，在分析天平上用直接称量法称取硼砂(N
6、a2B4O710H 2O : 十水合四硼酸钠)基准物 0.3800g (1.9000g，称准至 0.1mg)，转移至洁净的 250ml 烧杯中，从洗瓶中挤出少量蒸馏水冲洗表面皿 3 次，洗液一并转入烧杯，加入蒸馏水至约 100ml，搅拌溶解（浓度大的要加热）。将溶液全部转入洁净的 250mL 容量瓶中定容。计算硼砂标准溶液的浓度（0.00398 或 0.0199M）。（三）酸度的标定取洁净的 25mL 碱式滴定管一支，用少量硼砂标准溶液淌洗 3 次。准确移取待测溶液 20.00mL 于 250mL 洁净的锥形瓶中，加入甲基红指示剂 2 滴，用硼酸溶液滴定，至溶液颜色由黄色转变为橙色，即为滴定终
7、点。记录所消耗硼砂的体积，平行滴定 3-4 次。计算柠檬溶液的总酸度。（四）2，6二氯酚靛酚溶液的标定：取 5ml 维生素 C 标准液及 5ml1%草酸溶液于 50ml 的锥形瓶中，用配制好的 2，6二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持 15s 不褪色，即滴定终点。此时所用染料的体积相当于0.1mg 维生素 C，由此求出每 ml2，6-二氯靛酚溶液相当于维生素 C的 mg 数（五）取柠檬，需去皮、去柄、去核，切成块状，置于搅拌机中捣碎并混均，过滤，准确移取 25ml 柠檬汁于 250ml 容量瓶，用1草酸稀释至刻度，充分摇匀。（六）用移液管吸取滤液 5 或 10ml 于 50m
8、l 的锥形瓶中，立即用标定过的 2，6二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色 15s 不褪色为止。记录所用染料的 ml 数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过 2min。 （此步骤平行作 23 次）（一） 计算维生素 C 含量（mg/100g 样品）=（VT/W）100式中：V 为滴定样品所耗用的染料的平均 ml 数T 为 1ml 染料相当于维生素 C 的 mg 数W 为滴定时所用样品稀释液中含样品的 g 数五、数据记录与处理1、总酸度的测定硼砂的质量 M/g 1.9154硼砂浓度 C/(mol/l) 0.02009V 初读数/ml V 终读数/mlV/ml0.0117.8817.870
9、.1018.0017.900.0917.9717.88CH+（mol/L） 0.03590 0.03596 0.03592平均 CH+（mol/L） 0.03593绝对偏差 di 0.00003 0.00003 0.00001相对平均偏差 Rd(%) 0.12、柠檬中 Vc 含量的测定测点次数 V 初读数/ml V 终读数/mlV/ml0131171041.212.241.032.243.271.03V 初读数/ml V 终读数/mlV/ml3.333.710.383.714.090.384.094.460.37平均体积/ml 0.38维生素 C 含量 36.64 36.89 36.89（mg
10、/100ml）=（VT/W）100平均维生素 C 含量（mg/100ml）36.81绝对偏差 di 0.17 0.08 0.08相对平均偏差 Rd(%) 0.3六、注意事项1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素 C 被氧化。滴定过程一般不超过 2min。滴定所用的染料不应少于 1ml 或多于 4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释；2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢； 3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与 2，6二氯酚靛酚反应，但反应速度均较维生素 C 慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形
11、瓶直至呈粉红色 15s 不褪色为终点；4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、30%Zn（AC） 2和 15%K4Fe（CN） 6溶液等，本实验用30%Zn（AC） 2和 15%K4Fe（CN） 6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。5.在生物组织和组织提取液中，维生素 C 还能以脱氢维生素 C 及结合维生素 C 的形式存在，它们同样具有维生素 C 的生理作用，但不能将 2，6二氯酚靛酚还原脱色.6. 2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而 1%的草酸无此作用七、数据分析与总结此次有 7 同学参与该实验研究，我们将 7 同学分成 2 组，一组 4 人，一组 3 人
12、，第 1 组是做硼砂准溶液的配制和柠檬总酸度的标定和维素C 的定量测定2，6-二氯酚靛酚滴定法，第 2 组是做 NaOH 标准溶液的标定柠檬中总酸度的测定和碘量法。结果如下：第 1 组的结果：总酸度的平均值为 0.03593mol/L ，相对平均偏差为 0.1%；Vc 的平均含量为 36.81mg/100mol，相对平均偏差为 0.3%。第 2 组的结果：总酸度的平均值为 0.02580mol/L ，相对平均偏差为 0.004%；Vc 的平均含量为 26.63mg/100mol，相对平均偏差为 0.2%。比较两个实验的误差大小来说明哪个更实验方法更适合测定。由于第 2 组的相对平均偏差较小，所以该方法适合于柠檬中总酸度及 Vc 含量的测定。八、心得体会在经历了三个星期的实验，我会了很多东西，虽然以前也做了很多同类实验，但都是照课本上实验并未像此次以小组形式自行设计实验方案。刚开始时有点慌张，不过到后面我们就静下心来认真完成实验。实验过程中有些出错，如维生素 C 含量额测定时柠檬汁不需加热，小组为准备充足将其加热，在滴定时导致浓度偏低，经过老师的指导我们改进了实验，同时在实验过程中学会思考遇到的问题的解决的方法，最后在其他成员的协同帮助下我们成功的完成了实验。
