1、实验八 水中细菌总数,大肠菌群数的测定一 实验目的1了解采取水样的方法2 学习水样的细菌总数的检测原理和方法3 学习水样的大肠菌群数的检测原理和方法二 实验原理1 水中细菌总数可说明被有机物污染的程度.细菌数越多,有机物质含量越大. 我国规定自来水 1mL 的总菌数不得超过个本实验应用平板菌落计数技来测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下。使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出未的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。 若水源被粪便污染，则有可能被肠道
2、病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，不易检测因此要找一个合适非病原的指示菌，来指示水被粪便污染的情况，从而知识水源被肠道病原菌的污染情况最广泛应用的是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经小时培养能产酸产气我国规定每升自来水中的大肠菌群不超过个平板培养基一般使用远藤氏培养基或伊红美蓝琼脂，前者含有碱性复红染料，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色，使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色的复合物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，作为指示剂大肠菌群发
3、酵乳糖造成酸性环境时，两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的，带核心的，有金属光泽的深紫色菌落三 实验器材1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板，伊红美蓝琼脂培养基平板 无菌生理盐水，无菌吸头，涂布棒，酒精灯等四 实验方法 水样稀释液的制备 用 lmL 移液器，吸取水样 lmL，移入装有 9mL 无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成 10-稀释液；再用 lmL 移液器，吸取 10- 稀释液 lmL，移入装有 9mL 无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成 10-稀释液；再换一支无菌吸头吸取 10-稀释液lmL，移入装有 9mL 无菌水的试管中，振荡，即成 10-
4、稀释液；以此类推，连续稀释，制成 10-2、10-3、10-4 、10-5 等一系列稀释菌液。 平板涂布将牛肉膏蛋白胨培养基平板编号，然后用移液枪吸取 10-3、10-4 、10-5 等一系列稀释菌液各 0lmL 对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设两个重复） 。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂布均匀，每个稀释度用一个灭菌涂布棒；更换稀释度时需将涂布棒灼烧灭菌。将伊红美蓝平板编号，然后用移液枪吸取 10-3、10-4 、10-5 等一系列稀释菌液各 0lmL对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设一个平板） 。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂布均匀 培养将涂布好的平板平放于桌上
5、 2030min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转。恒温37培养, 两天后观察.五 实验思考题1 大肠菌群的定义是什么？答：需氧及兼性厌氧、在 37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等 为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？答：体中的病原微生物常因数量较少而难以检出，即使检出结果为阴性，也不能保证无病原微生物存在；同时检出手续也很复杂。所以，在实际工作中常借用检查水体中有无“指示菌” 存在及其数量多少来判定水质是否被污染。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过 3 个。 伊红美蓝培养基中含有哪几种主要成分？在检测大肠菌群时各起什么作用？答：伊红美蓝培养基中含有蛋白胨、乳糖、 蔗糖、 磷酸氢二钾、 伊红、 美蓝、 蒸馏水，大肠杆菌的代谢产物可以与伊红结合，使菌落呈深紫色；与美蓝结合有金属光泽。
