1、基因分子生物学实验EB 的染色原理溴化乙锭（EtBr，EB）为芳香族荧光化合物，是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。是一种核酸染料，常在琼脂糖凝胶电泳中用于核酸染色；是一种强的诱变剂，可能也是一种致癌物或致畸剂。EB 与核酸的作用原理：这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间，在紫外线激发下，未与核酸结合的溴化乙锭可被激发出橙红色萤光。在与 DNA 或双股 RNA 结合时，萤光强度会增强 20 倍，使得核酸电泳后的胶片可以辨识核酸的相对位置。在核酸分子中，EB 分子插入到两层碱基对之间，发出红色荧光。在凝胶中加入终浓度为 0.5g/ml 的 EB，可以
2、在电泳过程中随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。问题讨论1、溴化乙锭 EB 在琼脂糖凝胶电泳中先加与后加的区别？先加 EB，染色与电泳同时进行：a. 加在胶里总体积小，所以比较方便节省；b. 会导致胶的整体背景稍微高些，比较暗；c. 长时间、长距离的电泳先加 EB 的话，信号强度会相应下降；d. 不宜用于核酸分子大小的确定和定量。原因分析：EB 带正电荷，中和核酸分子的负电荷，同时由于的他的嵌入增加了核酸分子的刚性，使迁移速率减慢，故不宜用于凝胶电泳测定核酸分子的大小。另外，由于在凝胶中，游离的 EB 分子向负极泳动，会使样品中前后各带染色不均匀，影响定量。后加 EB，染色
3、在电泳完成后：a可以减少污染，无背景色，图较漂亮；b. 相对浪费时间。2、EB 废物的如何处理？EB 废物的处理如下：(1) 对于 EB 含量大于 0.5mg/ml 的溶液，可如下处理： a. 将 EB 溶液用水稀释至浓度低于 0.5mg/ml； b. 加入一倍体积的 0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的 25mol/L HCl，混匀， 置室温数小时； c. 加入一倍体积的 2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。(2) EB 含量小于 0.5mg/ml 的溶液可如下处理： a. 按 1mg/ml 的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置 1 小时； b. 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。如果你只是手接触了用 EB 污染的东西,用肥皂水洗一下就没事了。一定要带手套操作有 EB污染的实验。EB 有很强的诱变剂，操作时一定要慎重。
