1、附件一： 沙门菌分离鉴定标准程序（一）检验程序图（二）分离、鉴定标准操作程序1 SBG 增菌样品在 SBG 增菌培养基中 361增菌 16 小时。2 可疑菌落分离 取增菌培养液一环接种沙门菌科玛嘉显色培养基或 SS 培养基上 361培养过夜；361 1824 小时361 1824 小时361 1824 小时361 1824 小时Carry-Blair 运送培养基采集保存粪便标本本SBG 增菌液 37增菌 18-24 小时接种科玛嘉沙门菌显色培养基或 SS 培养基挑取紫色、淡紫色菌落（科玛嘉）或无色透明、中心黑色菌落（SS）3-5 个转种 KIA、MIU选 K/A，产气 +，H 2S+ -，动力
2、+，靛基质-，尿素- 菌落进行 ONPG 鉴定试验做 O 多价、 O 因子及 H 相血清学诊断，于 Swarm Agar 琼脂平板进行相应“H 2 相”诱导做 H2 相血清诊断，凝集阴性再次进行诱导或 U 型管诱导血清凝集结果报告符合菌落接种于哥伦比亚琼脂平板（“O” ）和软琼脂平板（“H” ）361 1824 小时361 1824 小时菌株保存 挑取紫色、淡紫色菌落（科玛嘉）或周边无色透明、中心黑色菌落（SS）转种KIA、MIU 生化筛选培养基，361培养过夜； 挑取 K/A，产气+，H 2S+/-，动力+，靛基质-，尿素-的反应管菌株，进行 ONPG 鉴定试验，阴性者进行血清学凝集试验。3
3、血清玻片凝集试验 符合菌株接种于哥伦比亚琼脂平板及软琼脂平板表面中央，361培养过夜。 哥伦比亚琼脂平板菌落进行 O 多价、O 因子血清凝集，定 O 抗原型； 取软琼脂周边扩散菌苔做 H 相多价、单价血清诊断，确定 H1 相抗原； H1 相凝集阳性者，用该相诱导血清血清 1 滴于 6cm 平板中，倾入 50 8ml Swarm Agar 琼脂，轻柔混匀，放置待凝固；盖在上面 361培养过夜,诱导相应的 H2 相； 从软琼脂边缘挑取少许菌苔，点种于 Swarm Agar 软琼脂平板软琼脂中央表面，361培养过夜； 证实已知的 O 相与 H 相结果，参照沙门菌血清分型表，挑取 Swarm Agar
4、 软琼脂呈扩散生长的菌苔边缘，依据常见“血清模式”诊断第 2 相，若仍不凝集再行诱导或U 管诱导。 沙门菌分型诊断血清的品牌认可度和良好的使用习惯和诊断结果之间有很大的关系，有条件的实验室准备 2 套以上（其中包含 1 套进口血清）血清用于疑难菌株的血清比对。 推荐使用规范格式的沙门菌血清型的中英文报告方式。例：检出肠炎沙门菌（血清型） Salmonella enterica serovars Enteritidis(S.Enteritidis)。4生化鉴定使用 API 20 E 生化编码鉴定试验。5报告结果根据 2008 年第 9 版 Kauffman-White 沙门菌抗原表，生化和血清学符合沙门菌特征者报告最终的血清型。少数生化和血清变种的报告须经国家级专业实验室最终鉴定报告。6. 菌株保存和定期上送4半固体培养基保菌菌种至少 2 套（穿刺接种后 36培养过夜即可）或 30%甘油肉汤冻存管-70保存菌株至少 2 套。按照方案要求定期上送。
