1、维生素的测定,一、维生素概述二、VC及其测定三、VA及其测定,学习目标,1、了解维生素的基本理论知识 2、理解维生素C的生理学功效 3、掌握维生素C氧化还原滴定的原理、方 法 4、了解维生素A的生理学功效 5、掌握维生素A的三氯化锑比色法测定的原理和方法,Vitamin 维他命 维生素人体中微量存在（mg，g），但不可缺少，具有重要的生理调节功能,水溶性维生素：Vc B族维生素,脂溶性维生素：VA VD VE VK,维生素概述,表1 维生素的俗名和营养功能,维生素的特点：外源性：人体自身不可合成，需要通过食物 补充； 微量性：人体需要量很少，以毫克(mg)或微克(g)计 调节性：维生素能够调节
2、人体新陈代谢或能量转变； 特异性：缺乏了某种维生素后，人体将呈现特有的病态。,一、维生素C的营养学功效,1、VC的发现,早期的海上旅行引起了人们对坏血病的重视，船队离开港口34个月，船员往往会 患上坏血病，这是由于海上旅行缺乏新鲜蔬菜和水果的缘故。1932年英国军医从柠檬汁中分离出具有抗坏血病的晶状物质，1933年瑞士科学家合成了维生素C，又叫做抗坏血酸。,2、VC的生理功能(1)提高人体的免疫力; (2)预防坏血病; (3) 促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血；,(4)治疗贫血; (5)促进骨胶原的生物合成，利于伤口的更快愈合 ;(6)减少色素沉着，美白,3、VC的缺乏症,4、VC的食物来源
3、,二、VC的测定,Vc的性质 1、结构中的烯二醇，具有较强的还原性2、分子结构中具有共轭双键，在稀盐酸溶液中，在243nm有最大吸收，在中性或碱性条件下，波长红移至265nm,1、氧化还原滴定法：2，6-二氯靛酚法2、分光光度法 : 2，4-二硝基苯肼法 3、高效液相色谱4、荧光法,（一） 2，6-二氯靛酚法,1、实验原理：抗坏血酸与2，6-二氯靛酚（红色染料）发生氧化还原反应，本身被氧化成脱氢抗坏血酸，在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比，当样品中的VC被作用完之后，稍过量的染料使溶液变为粉红色，即为滴定终点。根据2，6-二氯靛酚消耗
4、的量计算样品中所含维生素C的含量。,2、实验试剂：(1)草酸溶液：溶解20g草酸结晶于200mL水中，然后稀释至1000mL。(2)抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1草酸溶液中，移入lOmL量瓶中，并用1草酸溶液稀释至100mL，混匀，置冰箱中保存。使用时吸取上述抗坏血酸5mL，置于50mL容量瓶中，用1草酸溶液定容。此标准使用液每毫升含0.02mg维生素C。(3)2，6-二氯靛酚溶液：称取碳酸氢钠52mg，溶于200mL沸水中,然后称取2.6-二氯靛酚50mg，溶解在上述碳酸氢钠的溶液中， 置于冰箱中过夜，次日过滤置于250mL量瓶中，定容至刻度。此液应贮于棕色瓶中并冷藏，每
5、星期至少标定1次。,3、标准溶液的标定标定方法：取5mL已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1草酸溶液5mL，摇匀，用上述配制的标准溶液滴定至溶液呈粉红色,15秒不褪色为止每毫升标准溶液相当于Vc的毫克数=滴定度(T)CV1MT=-V2 式中：C; 抗坏血酸的浓度(molmL)Vl：抗坏血酸的体积(mL)V2：消耗标准溶液体积(mL)M: 抗坏血酸的摩尔质量(g/mol),4、实验步骤： （1）样品制备：称取适量(50.0-100.0g)样品，加等量的1草酸溶液，倒入组织捣碎机中捣成匀浆。过滤于锥形瓶中备用。（2）滴定：迅速吸取5-l0mL滤液，置于50mL三角烧瓶中，用标定的2,6-二氯靛酚标准
6、溶液滴定,直至溶液呈粉红色,15秒内不褪色为止。,5、结果计算： 每百克样品中抗坏血酸毫克数Vc（mg/100g） 式中 V：滴定时所耗去标准溶液的体积(mL)；T：lmL标准溶液相当于抗坏血酸标准溶液的质量m：滴定时所取的滤液中含样品量(g)100以每100g样品计。,注意事项: 1、加入草酸的作用 2、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化 3、若样品滤液无色，可直接测定，若样液具有颜色，用白陶土(应选择脱色力强但对抗坏血酸无损失的白陶土)去色 食品分析的特点 4、测定样品溶液时，要同时做一空白对照， 计算时，样品滴定的体积数须扣除空白液滴定 的体积数。,实验原理：用酸处理过的活性炭
7、把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的络合物。其呈色的强度与维生素C的浓度成正比，可以比色定量。 max=540nm定量方法：工作曲线法,（二） 2，4-二硝基苯肼法,1、样品处理 2、配制一系列不同浓度的标准溶液 3、分别测定标准溶液的吸光度 4、以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制工作曲线 5、相同条件下，测定待测样品的吸光度 6、工作曲线上计算待测样品中Vc的含量,一、维生素A的营养学功效,1、维生素A的性质维生素A又称视黄醇，是一个具有酯环的不饱和一元醇 为淡黄色油溶液， 性质不稳定，在空气中易氧化，遇光易变色，易被紫外光裂解。 包括维生素A1、A2
8、 两种，主要存在于动物体内 深色蔬菜中的胡萝卜素在体内可以转化为VA,2、维生素A的生理功能1）维持视觉正常 2）促进生长发育,3）加强免疫能力 4）清除自由基,5） 维持上皮结构的完整与健全 维生素A可以调节上皮组织细胞的生长，维持上皮组织的正常形态与功能。保持皮肤湿润，防止皮肤黏膜干燥角质化，不易受细菌伤害，有助于对粉刺、脓包、皮肤表面溃疡等症的治疗,3、维生素A的缺乏症 1)、暗适应能力下降、夜盲及干眼病 2)、粘膜、上皮改变 3)、生长发育受阻4)、其他 味觉、嗅觉减弱，食欲下降。,4、维生素A的食物来源,表2 几种食物的维生素或胡萝卜素含量 单位：ug/g,二、维生素A的测定,三氯化
9、锑比色法在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该物质在620nm波长处有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。,本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于510g/g），对低含量样品，因受其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。, 无水硫酸钠 不吸附维生素A 乙酸酐 无水乙醚 无水乙醇 三氯甲烷 250gL三氯化锑一三氯甲烷溶液 1：1氢氧化钾溶液 0.5molL氢氧化钾溶液 维生素A
10、标准溶液 酚酞指示剂,试剂,操作步骤 样品处理 因含有维生素A的样品，多为脂肪含量高的油脂或动物性食品，故必须首先除去脂肪，把维生素A从脂肪中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法。,皂化法适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素A的损失。操作方法： 1、皂化：称取0.55g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及2040ml乙醇，在电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇。若无浑浊现象，表示皂化完全。2、提取：乙醚回流提取3、浓缩： 用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减压抽干，立即
11、准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右），使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内（35g）。,A、皂化法,研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于510g样品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确操作方法：1、研磨： 精确称取25g样品，放入盛有35 倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。2、提取：乙醚提取，使样品中的维生素A全部溶于乙醚中；3、浓缩： 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在7080水浴上抽气蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残渣。,B、研磨法, 标准曲线的绘制 准确吸取维生素A标准溶液0，0.l，0.2，0.3，0.4，0.5ml于 6
12、个10ml容量瓶中，用三氯甲烷定容，得标准系列使用液。 取6个3cm比色管顺次移入标准系列使用液各 lml，每个比色管中加乙酸酐1滴，制成标准比色列。于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸光度至零点；迅速加入9ml三氯化锑显色，于6s内测定吸光度以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线。, 样品测定取两个3cm比色管，分别加入1ml三氯甲烷（样品空白液）和lml样品溶液，各加1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备，分别测定样品空白液和样品溶液的吸光度从标准曲线中查出相应的维生素A含量。,结果计算每百克样品中维生素A的毫克数 VA（mg/100g）式中 :c由标准曲线
13、上查得样品溶液中维生素A的含量，g/ml；c0由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，g/ml； V样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，ml； m样品质量，g；100以每100g样品计。,注意事项 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S后便开始比色，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读取吸光度。 由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡后再清洗。,学习目标,1、了解维生素的基本理论知识 2、理解维生素C的生理学功效 3、掌握维生素C氧化还原滴定的原理、方 法 4、了解维生素A的生理学功效 5、掌握维生素A的三氯化锑比色法测定的原理和方法,Thats all ,Thank you!,
