1、基因 DNA序列 BLAST及 系统 发育树构建操作步骤 1、 输入 “http:/blast.ncbi.nlm.nih.gov”网址。得到：图 1 2、 单击 nucleotide blast 图 1 3、 得到新页面：图 2 4、 复制粘贴测序公司提供的 DNA序列到 blastn窗口 5、 勾选 “结果显示在新窗口 ”，单击 “blast” 图2 6、 得到新窗口：图 3 图 3 7、 下拉页面，如：图 4 8、 选择 Accession下的基因编码。入选第一个 “HQ711983.1” 图 4 9、 得到新窗口如：图 5 10、 单击 FASTA 图 5 11、 得到如：图 6 12、
2、 复制菌株种名 跟 16SrDNA序列，并粘贴到 “.txt”文件中 图 6 13、 新建 “.txt”文件，如：图 7 14、 把测序菌株 16SrDNA序列和选取 blast所得的匹配度高的菌株 16SrDNA序列粘贴在“.txt”文件下，在菌株种名前加 “”，每个序列后空一行 图 7 15、复制 “.txt”文件，改 “.txt”文件为 “.fasta”文件，如：图 8 图 8 16、 用 MEGA 4.0.2软件打开 “.fasta”文件，如：图 9 图 9 17、 单击 Alignment里的 Alinment Explorel/CLUSAC，如：图 10 图 10 18、单击 Al
3、ignment里的 Align by clustalW，如：图 11 图 11 19、在弹出窗口中单击 OK，如：图 12 图 12 19、在弹出窗口中单击 OK，如：图 13 图 13 20、等待数据运算，如：图 14 图 14 21、 运算结束，关闭当前窗口。如：图 15 22、 在弹出的第一个窗口单击 NO 图 15 23、 在弹出的第一个窗口单击 YES，如：图 16 图 16 24、将文件以 “.meg”格式保存，如：图 17 图 17 25、关闭其余窗口，打开刚刚保存的 “.meg”文件，如：图 18 图 18 26、选择 phyloeny下的 Bootsteap Test of phylogeng下的 Neighbor-Joining.,如：图 19 图 19 27、在弹出窗口单击 Compulte，如：图 20 图 20 28、单击树状图，得到系统发育树，建议截图保存，如：图 21 图 21
