1、检测方法GC-MS 法测定动物食品中的三聚氰胺Spectra-Quad 实现三聚氰胺含量在线检测超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚 氰胺反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺高效液相色谱法(HPLC)测 定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰 胺液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚 氰胺液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留GC-MS 法测定动物食品中的三聚氰胺附：三聚氰胺检测方法示例仪器与条件高效液相色谱仪；二极管阵列
2、检测器(DAD)，检测波长 240nm，柱温：40。(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6250mm);缓冲液：10mM 柠檬酸,10mM 庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6250mm);流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0;流速：1.0mL/min;离子交换固相萃取柱 AgelaClearnertTMPCX试剂与样品宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购
3、于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma 公司);甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。实验方法1、样品前处理方法(1)标准样品配制：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50mL 得到 1000ppm 的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。(2)提取：称取饲料样品 5g，加入 50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2mL2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取部分溶液转移至 10mL 离心管中，8000rpm/min 离心 10min，取上清液 3mL 过混合型阳离子交换小柱(PCX)。(3)净化(PCX 小柱，60m
4、g/3mL)：a)活化及平衡：3mL 甲醇，3mL 水b)上样：加入提取液 3mLc)淋洗：3mL 水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。d)洗脱：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL 氨水+95mL 甲醇)。e)浓缩：50，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL，HPLC 分析或衍生后 GC/MS 分析。2、三聚氰胺被立案2.1 三聚氰胺 HPLC-UV 检测方法三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相 C18 柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用
5、艾杰尔(Agela)ASB 系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果：(a)色谱柱：VenusilASBC84.6250mm;标准：FDA 方法;流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0;流速：1.0mL/min;柱温：40oC;波长：240nm(b)色谱柱：VenusilASB-C184.6250mm;标准：中国农业部颁标准方法;缓冲液：10mM柠檬酸,10mM 庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱温：40;波长：240nm空白加水平(mg/L)回收率 0.01116%0.1108%0.592
6、%296%2.2 三聚氰胺 LC-MS 检测方法由于 FDA 公布的 HPLC-UV 方法中，流动相添加了离子对试剂，因此限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的 C18 柱上保留很差，不能得到较好的分离定量3。基于此问题，艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用艾杰尔(Agela)ASB 系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂，可以用于质谱检测。与 FDA2007 年 4 月公布的UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)相比较，该方法大大降低了最低检测限(
7、MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了检测灵敏度。以该方法分别在 ASB-C84.6250mmASB-C184.6250mm 得到很好的谱图。缓冲液：10mM 的 NH4AC;流动相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;进样量：样品先用 70%ACN 溶解成约 1mg/mL，用 ACN 稀释成 0.1mg/mL，进 10uL;柱温：40;波长：240nm结果与讨论1、阳离子交换柱(PCX)三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂
8、上，具有阳离子交换和反相吸附两种机理，并具有以下优点：a)可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定 pH 值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。b)批次重复性好。c)回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。2、LC-MS 方法优点：(1)检测过程简便：无须添加离子对试剂，三聚氰胺就可得到良好的保留与分离，避免了配制离子对流动相的复杂过程。(2)提高了检测的灵敏度：无离子对试剂，可以用于质谱检测器，大大降低了最低检测限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。(3)降低了检测成本：不用离子对试剂，就不再需要买价格较贵的离子对试剂了，从而降低了检测成本。(4)延长了色谱柱的使用寿命：避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。(5)该方法所使用的色谱柱具有通用性：无论是用 FDA 方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的 LC-MS 方法，使用艾杰尔(Agela)ASB 系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果，从而给客户提供了多种选择空间。国家食品质量监督检测中心有关人士说，在现有的国家标准奶粉检测中，主要进行蛋白质、脂肪、细菌等检测。三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的，所以现有标准不会包含相应内容。也就是说，三聚氰胺不属于常规检测项目，正常情况下，很少有人会想到去检测它。
