1、病毒纯化浓缩方法方法一 超速离心沉淀法 1 仪器超速离心机(BECKMAN OPTIMAL-80XP) 5000080000rpm 相对离心力最大可达 510000g；高速冷冻离心机 (BECKMAN AVANTIJ-26XP)2000025000rpm 最大离心力为 89000g；超速离心管 (Beckman 344058)，Ultra-clear SW28 离心管2 方法步骤 （1）转染后 44-48 小时，收集上清液到 50ml 离心管内，并加入20ml Production 培养基以便第二轮病毒的收集。将收集的上清液 4，4000g离心 10 分钟，去除细胞碎片，然后 0.45 m 滤
2、膜过滤到 40ml 超速离心管中。 （2）取 6 个 Beckman 超速离心管，70%乙醇清洗后在生物安全柜中风干并紫外消毒 30min。（3）每个 Ultra-clear SW28 管加入 30ml 预先处理过滤过的病毒上清。（4）取一支 10ml 的移液管，吸取 12 ml 20%的蔗糖溶液(PBS 配制)。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出 4 ml，形成一个蔗糖垫。同样地，将剩下 8 ml 的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下 3 管进行同样处理。（5）务必确定离心管没有裂缝且用 PBS 调整各管重量使两两平衡。（6）4离心，25000rp
3、m （82700g ）2 h。（7）离心完毕后小心取出超速离心管，小心弃去上清液，留下管底沉淀。管底可见少量的半透明或白色沉淀。 将超速离心管倒置在吸水纸上晾干约 10min，并用 Tip 头吸去管壁上多余的液体。（8）每管中加入 100ul 不含钙和镁的冷 PBS 洗下沉淀。（9）将 SW28 超速离心管插入到 50ml 锥底离心管中，盖上盖子。（10）在 4溶解 2 小时，每隔 20 分钟轻轻震荡。（11）4 ，500g 离心 1 分钟，使溶液集中于管底。（12）用 200l 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个 SW28 离心管中，分装 50ul/管，保存于
4、成品管中，用碎干冰速冻后储存在-80冻存。方法二 PEG-8000 浓缩法(1) 5X PEG8000+NaCl 配制称取 NaCl 8.766 g; PEG8000 50g 溶解在 200ml Milli-Q纯水中；121 摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在 4。(2) 使用 0.45m 滤头过滤慢病毒上清液；(3) 每 30ml 过滤后的病毒初始液，加入 5X PEG-8000+NaCl 母液 7.5 ml；(4) 每 20 30min 混合一次，共进行 3-5 次；(5) 4 度放置过夜；(6) 4 度，4000 g，离心 20min；(7) 吸弃上清，静置管子 12 分钟，吸走残余液体； (8) 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；(9) 集中后的病毒悬液分装成 50 l 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 方法三 慢病毒纯化浓缩试剂盒1. 每 10ml 过滤后的病毒初始液，加入 Concen Solution 3ml，每 20-30min 混合一次，共进行 3-5 次。 2.2. 4放置过夜。 3. 4，3000 g，离心 45min。 4. 去掉上清，静置管子 1-2min，吸走残余液体。5. 加入无血清 DEME 充分溶解慢病毒沉淀。 6. 病毒悬液分装成 200l 每份, 保存在离心管中，速冻后储存在-80 。
