1、MLPA技术在产前诊断中的应用廖世秀河南省医学遗传研究所河南省产前诊断中心河南省人民医院1、高通量：一管反应可同时检测40个左右核苷酸拷贝数变化2、极少的模板DNA：每次反应只需约10-20ngDNAMLPA 技术的优势多重连接依赖式探针扩增( Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification ,MLPA):2002年由荷兰学者Dr. SchoutenJP首次提出，其特点3、准确度高：每个步骤（包括数据分析）均设计有多个内部对照4、操作较为简单：产物可用琼脂糖凝胶电泳分离或通过毛细管电泳等进行分离5、成本低，便于用于大量样品分析6、重复性强：探针
2、的变异系数仅3% 8%MLPA技术原理一、染色体数目异常 传统染色体核型分析至今仍是国内外染色体产前诊断的金标准MLPA技术在染色体非整倍体诊断中应用的主要优势在于： 无需细胞培养、快速、高效， 相对FISH 和 CGH简单、廉价，适于推广 目前主要应用于13、18 、 21 、 X和Y染色体拷贝数的快速诊断每管 aneuloid反应包含 8个 13、 18、21、X 染色体探针和 4个Y 染色体探针待测样本标化值与对照相应探针的标化值相比较，得到比值 (Ratio)每个峰实测面积 (As)与所有峰面积( As)平均值相除而被标准化.211813X.211813XY正常男性正常女性该比值即反应
3、样本DNA 拷贝数的变化Chr.13Chr.18Chr.21Chr.XChr.Y1正常对照的 Rito分析图：21三体综合征18三体18三体综合征13三体综合征二、MLPA技术在缺失 /重复突变产前诊断中的应用2.1 假肥大性进行性肌营养不良 （DMD/BMD ）DMD是最常见的 X连锁隐性遗传致死性肌病，发病率约为 1/3500活产男婴其分子基础是抗肌萎缩蛋白（dystrophin ）基因的部分缺失、重复或点突变。约 65-75%的 DMD/BMD患者是由于 Dystrophin基因缺失或重复所致1. Drosiphin基因 79个外显子缺失 /重复检测正常样本毛细管电泳分析结果图（ABI3
4、130 ）正常样本琼脂糖电泳图正常对照DMD2011-8患者1.DMD患者Drosphin基因缺失分析E48/49/50缺失E48/49/50缺失E45缺失E51/52/53/54缺失DMD2011-19HE2-6缺失DMD2011-19AFE3-8缺失2、缺失携带者诊断对于没有家族史的女性携带者判断，是目前最有效的方式之一DMD29CVS E46-50杂合缺失DMD3 E8/E9杂合缺失3、重复突变诊断正常对照重复突变患者4、重复突变携带者诊断重复携带者重复突变患者我们的体会1. 特别适用于散发病例女性携带者的判断DMD29CVS E46-50杂合缺失如：辛某，其子临床诊断DMD,无家族史2
5、008年其子行 Disdrophin基因热点区检测，结果为47 、50外显子缺失2011年孕早期在本所进行产前诊断（DMD2011-29 ），结果为SRY-, E46-50 杂合缺失间接反映辛某为携带者可能性极大（后经 MLPA证实）2. 在 DMD产前诊断中，传统的连锁分析技术仍然必不可少，因其 可以一定程度上排除污染或者样本混淆问题； 佐证直接基因分析的结果3. 尽管具备内对照， MLPA技术需要严格的外部实验对照SMA患者及携带者分析同时对 SMN1基因和SMN2 基因的拷贝数定量分析1. SMA基因诊断和产前基因诊断2. SMA携带者分析3. SMA的分子分型和预后预测吴玉等，MLPA和PCR-RFLP 技术用于脊髓性肌萎缩症的基因诊断. 中国计划生育学杂志，2008.9 （ 155）:535-539.22q11微缺失22q11微缺失综合征（22q11D ）是先天性心脏病(CHD) 的遗传病因之一，由其引起的CHD 预后不良染色体22q11 区域高密度多重连接探针检测技术能快速、灵敏、精确定位诊断染色体22q11 区域基因拷贝数异常，适合于 CHD的遗传学诊断
