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流式图入门.doc

1、流式数据可以用一维直方图、二维散点图、等高线图、密度图等来表示,下面逐一附图说明。1.单参数直方图:每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布,以直方图的方式来显示。在图中,横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,其单位是道数,可以是线形(line)或者对数(log)。纵坐标一般是细胞数(count)!如下图:上图中 2N 代表 G0/G1 期细胞,4N 代表 G2/M 期细胞,两者中间代表 S 期细胞。这是以 2 倍体和 4 倍体细胞为主的流式 DNA 图。下图为含有大量非整倍体细胞 G0/G1(2.8N)和 G2/M(5.6N)。直方图当然不仅仅是用来表示 DNA 含量的,例如:上图

2、中 101102(M1)为阴性细胞,101 以上的(M2)为阳性细胞。这里有一个在常见的问题:如何做 M1 阴性界限?!实际上,这个 M1 的划分完全是根据阴性对照来的!如下图:红色部分代表阴性对照,即:您所检测 的物质在阴性组中的基础表达量,可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组,也就是接受刺激后,功能状态下、药物作用后等。如果您还要问:怎么这么巧,正好在 101 这儿划分?呵呵,原来偶也这么“傻傻”地问过!因为我们可以人为地将电压,放大调到相应的大小以达到阴性的右边界在某一个值上,这样后期做 sample 时好看!当然您也可以调到 10 的 2 次方,3次方。

3、只要机器电压允许,阳性组还有地方放得下。2.散点图:用一个例子来说明:左上:CD4右下:CD8左下:CD4/CD8右上:CD4/CD8散点图常被用来分析多参数数据,如上面 CD 分子的表达,以及凋亡周期特异性,早期凋亡的检测等!如下图:AnnexinV-FITC/PI 染色。关于 AnnexinV-FITC/PI 染色右上角的意义,现在有几种说法:1)坏死晚期凋亡2)晚期凋亡3)坏死(如下图)4)其它:(如下图)我们实验室倾向与第一种说法!大家做实验时要注意!散点图可以用来进行多参数分析,上面已经提到。至于参数选择,就可以自己选择了,也许您可以发明一种新的方法来作为试验平台呢!3.等高线图和密度图这两种图其实就是密度图的变化,等高线图和地图一样。密度图则与等高线图密切联系,密度高的地方颜色就偏红些。

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