1、DNA粗提取与鉴定,1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构.,2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧.,3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对.(原则),根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？,DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。
2、,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？,当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度较大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。,2、 DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性3、DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。,1、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以提取出含杂质较少的DNA。,实 验 过 程,二、DNA的释放,一、材料的选定,三、DNA与蛋白质等分离,四、DNA的析出、获取、鉴定,一、材料的选定,1、 DNA含量是否较高？,
3、2、材料是否好取材？,3、是否容易提取DNA（ 植 / 动 ）？,为什么不用哺乳动物的红细胞？,1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？,2、如果实验材料是植物细胞又该如何处理？,3、加洗涤剂和食盐的作用是什么？,4、提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的 搅拌和研磨。如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,二、DNA的释放,1、获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？,2、为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎样的进一步处理？,3、为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？,4、方案二和方案三的原理有什么不同？,三、DNA与蛋白质等物质分离,2、如何鉴定DNA分子？还
4、可以用什么物质来鉴定？,1、纯的DNA应该是什么颜色？,四、DNA的析出、鉴定,1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）,玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。除去血液中的上清液,即血浆,2.提取DNA,取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。,纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。,.提取血细胞核物质,.溶解核内的DNA,滤液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。,实验步骤,.析出含DNA的粘稠物,.滤取含DNA的粘稠物,. DNA粘稠物的再溶解,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此
5、时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。,用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。,在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。,.过滤含有DNA的NaCl溶液,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得的溶液，滤液中含有DNA。,.提取含有杂质较少的DNA,步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。,3.DNA的鉴定,加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现蓝色。,1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”,2.加入“
6、两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”,三、实验小结,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,提取DNA, A出现蓝色 B无变化,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量
7、 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色,4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?,答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。,答：D,5、关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是A、充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液 B、实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点 C、对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热 D、实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同,B,
