1、课时跟踪检测（四） 微生物的实验室培养一、选择题1下列对常用的无菌操作的描述，错误的是( )A无菌操作的目的是防止杂菌污染B对操作者进行消毒的方法是用酒精擦拭双手C实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭进行灭菌解析：选 D 无菌技术的主要目的是防止培养物被其他外来微生物污染。对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验 操作过程应在酒精灯火焰附近 进行，防止瓶口空气中的微生物污染培养基。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干 热灭菌法 灭菌。2培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶 所采用的灭菌或消毒方法依次是( )化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线消毒 高
2、压蒸汽灭菌 巴氏消毒A BC D解析：选 A 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底地灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营成分，可采用巴氏消毒。3(江苏高考) 做 “微生物的分离与培养 ”实验时，下列叙述 正确的是( )A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选 D 在高压灭菌的操作过程中，加 热结束后应让
3、灭 菌锅内温度自然下降，待 压力表的压力降到零时，打开放气 阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一 边。接种 环经 火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记号笔做标记。4下列有关平板划线法操作的叙述，不正确的是( )A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种C在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细胞污染环境和感染操作者解析：选 C 在用平板划线法
4、分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是 为了避免 细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时 接种环上的菌种直接来源于上次划 线的末端。5为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( )A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温 4 保藏的方法解析：选 D 对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在 3 m
5、L 甘油瓶中加入 1 mL 甘油后灭菌，将 1 mL 培养的菌液 转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。6用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 ( )可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在酒精灯火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌A BC D解析：选 C 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器 进行操作； 进行接种操作时，要 进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体而不能计数活菌。7下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型
6、的描述，正确的是( )选项 项目 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻A 能源 NH3 乳酸 N2 光能B 碳源 CO2 糖类等 糖类等 CO2C 氮源 NH3 N2 N2 NO 3D 代谢类型自养需氧型异养厌氧型自养需氧型自养需氧型解析：选 B 从能源来看，硝化细菌的能源是氧化氨气为硝酸盐过程释放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌需要 NH 、NO ；从代谢类型看，根瘤菌 4 3为异养需氧型；从碳源看，硝化 细菌与衣藻需 CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖类等有机物。8下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为 1、2、3、4、5。下列叙述正确的是( )A在五个区域中划线前后都要对
7、接种环和培养基进行灭菌B划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D第 1 区和第 5 区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数解析：选 C 在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种 环迅速伸入平板内，划三至五条平行 线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否 则难以达到分离单 菌落的目的；第 1 区和第 5 区的划线不能相连。9平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( )A都要将菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固
8、体培养基表面连续划线的操作C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D都可在培养基表面形成单个的菌落解析：选 D 平板划线法不需要进行梯度稀释，稀 释涂布平板法需要将不同稀 释度的菌液涂布到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都可在培养基表面形成 单个菌落。10某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是( )A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次解析：选 B 在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换 划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌
9、种，再进行划线；接种后的培养皿 应放置在恒温培养箱中培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天 观察一次。二、非选择题11在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下： 配 制 培 养 基 灭 菌 、倒 平 板 培 养 观 察请回答下列有关问题：(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是_ 。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_。(2)倒平板的适宜温度是 50左右，原因是_ 。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止_。(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择
10、的涂布工具是图中的_；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的_。(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析：培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要 调节 pH。由 图可知， A 为接种 环， B 为涂布器，C 为胶头滴管，D 为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具应是 B，平板划线法应选择的接种工具是 A。由题意分
11、析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。有的大 肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案：(1)所培养微生物对各营养成分的需要量 调整 pH (2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固 皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 (3)B A (4)接种环灼烧后未冷却 划线未从第一区域末端开始 (5)灭菌12下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 加水定容至用量 5 g 10 g 5 g 2
12、0 g 1 000 mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、_和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_。培养基配制完成以后，一般还要调节 pH 并对培养基进行_处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑_ 、_和渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_(填“消毒”或“灭菌 ”)；操作者的双手需进行清洗和 _；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质_，还能损伤 DNA 的结构。(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和_ 。(5)在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。
13、解析：(1)培养基中都应含有水、无机盐、碳源、氮源。培养基配制完成后要调 pH 和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。 (2)配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压 等条件。 (3)灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以要对培养基和培养皿 进行灭菌。消毒是指使用 较为 温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物，故操作者的双手需要进行清洗和消毒。紫外线能使蛋白质变性，还能损伤 DNA 的结构。(4)分离纯化微生物常采用平板划 线法和稀释涂布平板法。(5)培养微生物时，在接种前需要检测 培养基是否被污染。 对于固体培养基 应采用的检测方
14、法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落 产生。答案：(1)氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌(2)温度 酸碱度 (3) 灭菌 消毒 变性(4)平板划线法 稀释涂布平板法(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生13请回答下列有关微生物培养与分离的问题：(1)微生物的培养都需要培养基，在配制固体培养基时加入的凝固剂一般是_。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般流程包括： 计 算 称 量 溶 化 A B上述流程中 A 代表_ ，实验室中这个步骤常用的方法有_；流程中 B 代表_ ，该步骤进行的适宜温度是_左右。(3)某微生物纯化培养的
15、结果如下图甲，在_( 填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是_个，据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是_(用编号表示 )。某研究者接种培养后得到的平板如图乙所示，推测接种时可能的操作失误是_。(4)将分离纯化的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易_；若需较长时间保存菌种，可用的方法是_。解析：(1)琼脂是制备固体培养基最常用的凝固剂。(2)制备 牛肉膏蛋白胨固体培养基的流程包括：计算 称量 溶化 灭菌 倒平板；灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌是实验室中常用的灭菌方法。(3)从图甲可知， 号区域出现 了单个菌落；1 个菌落由 1 个细菌繁殖形成；根据线条数量可判断，划 线的顺序依次是 。由图乙可知，菌落分布不均匀，推测接种时可能的操作失 误是涂布不均匀。 (4)试管斜面保存菌种，菌种易被污染或产生变异，若需较长时间保存菌种，可采用甘油管藏法。答案：(1)琼脂 (2) 灭菌 灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌 倒平板 50 (3) 1 涂布不均匀 (4)被污染或产生变异 甘油管藏法
