1、实验四 酵母菌和霉菌的形态观察一、目的要求1、观察酵母菌、老菌的个全形态以及它们之间的区别。2、学会用水浸法观察酵母菌和霉菌的技术。3、了解酵母菌和霉菌细胞的构造和繁殖方式的特点。二、实验材料1、接种针、接种杯、酒精杯、载玻片、盖玻片、吸管。2、0.1%美蓝液、乳酸-石炭酸液（配方见附录） 。3、菌种 啤酒酵母、假丝酵母、黑根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉。三、方法步骤（一）酵母菌的形态观察酵终菌是单细胞真核核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多，有的能形成假菌丝。繁殖方式较复杂，无性繁殖以出芽生殖为主，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。1、酵母菌的形态与出芽生殖的观察 在载片上滴一滴
2、蒸馏水，以无菌操作，用接种环挑取少许啤酒酵母置于载片上蒸馏水中，取一块盖片，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下；这样可避免产生气泡。先用低倍镜观察，再用高倍镜观察酵母细胞的形状、大小、构造、内含物及出芽方式。2、子囊孢子的观察 将啤酒酵母接种于麦芽汁液体培养中，于28-30培养 24 小时，连续传代 3-4 次，最后转接到培养子囊孢子的培养基上（也可用肉法蛋白胨培养基） 。25-28培养 3 天左右，涂片染色（按芽孢染色法）观察子囊孢子开关和特点，并注意每一个子囊内的孢子数等。3、假丝酵母观察 用划线法将假丝酵母接种在麦芽汁平板上。在划线部分加盖玻于 25-30培养 3 天先
3、观察菌落边缘，再取下盖玻片，在显微镜下观察呈树枝状分枝的假菌丝细胞的形状，或将皿盖打开，直接将培养皿放在载物台上，在低倍镜下观察。4、酵母菌菌落观察 取啤酒酵母、假丝酵母、园酵母以三点点植法接种于麦芽汁平板上，于 28-30坟 3 天。观察菌落表面、高度、边缘、质地和颜色等。5、酵母菌死活的检查 在载片上加一滴 0.1%美蓝，把酵母培养液滴加在美蓝液上，加盖玻片观察，死细胞为兰色，活细胞无色。（二）霉菌形态观察霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性孢子是怎样着生在孢子梗上及有
4、性孢子如何生成。由于霉菌菌丝较粗大，孢子很容易飞出，如果放在水中观察时容易收缩变形，所以在制标本时不用水，而用乳酸-石炭酸溶液，使细胞不致变形，并有杀菌作用。1、取培养有青老、木霉、毛霉、曲霉的平皿，挑取一团菌丝，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的载片上，加盖玻片，由于霉菌是由菌丝组成的，许多菌丝交错在一起形成菌丝体。在高倍镜下观察菌丝分隔情况，分成孢子着生情况（要求辨认分生孢子子梗、顶囊、小梗及分生孢子） 。2、取一培养有根霉的平皿观察假根、匍匐枝、孢子囊柄及孢子囊。注意假根着生情况。挑取少量菌丝，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的载玻上，加盖片。在高倍镜下观察孢子囊柄，孢子囊及子囊孢子。3、取一培养好的各种老菌菌落的平皿，注意观察菌落形态，表面质地，颜色及背面的特征。注意霉菌菌落与细菌、酵母菌落有何区别？4、观察红曲霉的子囊果、子囊及子囊孢子（示范） 。5、观察犁头霉的结合孢子、保护丝（示范） 。6、观察白地霉的裂生孢子（示范） 。四、实验作业1、把观察到的各种酵母、根霉、毛霉、曲霉、青霉绘图，并注明各部分名称。2、列表比较各类霉菌在形态结构上有何异同？
