1、植物学实验报告 左 20111/4ABA 对拟南芥气孔运动的影响左【实验目的】1. 了解气孔开闭对植物的意义。2. 了解气孔开闭的调控机制。3. 验证脱落酸(abscisic acid，ABA) 促进气孔关闭，抑制气孔开放。【实验原理】气孔（stomata） ，叶、茎及其他植物器官上皮上许多小的开孔之一，高等陆地植物表皮所特有的结构。气孔通常多存在于植物体的地上部分，尤其是在叶表皮上，在幼茎、花瓣上也可见到，但多数沉水植物则没有。狭义上常把保卫细胞之间形成的凸透镜状的小孔称为气孔。保卫细胞区别于表皮细胞是结构中含有叶绿体，只是体积较小，数目也较少，片层结构发育不良，但能进行光合作用合成糖类物质
2、。有时也伴有与保卫细胞相邻的 24 个副卫细胞。把这些细胞包括在内是广义的气孔（或气孔器） 。紧接气孔下面有宽的细胞间隙（气室） 。气孔在碳同化、呼吸、蒸腾作用等气体代谢中，成为空气和水蒸汽的通路，其通过量是由保卫细胞的开闭作用来调节，在生理上具有重要的意义。脱落酸（abscisic acid, ABA）是由 P.F.Wareing 和 F.T.Addicott 于 1967 年命名的。ABA 是异戊二烯为基本单位的倍半萜羧酸，也是一种重要的植物激素,受到生物胁迫和非生物胁迫的调控,在植物对胁迫耐受性和抗性中发挥着重要作用。在胁迫条件下,ABA 调控了气孔关闭和基因表达。在拟南芥、豌豆等植物的
3、保卫细胞中 ABA 能够诱导 H2O2 和 NO 的产生,在胁迫条件下,二者作为信号分子调控了促进气孔的关闭的生理过程。在干旱条件下,植物体内的ABA 含量增高,ABA 促进了开放的气孔关闭和抑制了关闭的气孔开放,最终结果是关闭气孔,植物学实验报告 左 20112/4从而降低了植物水分的蒸发。Figure 1 气孔开闭的调控（S. Pandey, et al. 20007）ABA 调控气孔开度的模式为:ABA 与其保卫细胞上受体相结合;ABA 调控了保卫细胞细胞质中 Ca2+浓度的增加;胞质中 Ca2+浓度的增加抑制了质膜上的H+泵;抑制了控制 K+内流的通道;激活了控制 Cl 外流的通道,最
4、终导致质膜的去极性化;质膜的去极性化激活了控制外流的通道,进一步抑制了控制 K+内流的通道;ABA 引起了胞质中 pH 的升高;胞质中 pH 的升高激活了控制 K+外流的通道,抑制了质膜上的 H+泵;K +和 Cl 由液泡进入胞质中。以上步骤的结果即是保卫细胞中 K+和 Cl 流出胞外,保卫细胞的膨胀程度降低,气孔关闭。【实验材料、试剂】拟南芥（46 天）完全展开的年轻叶片、开放缓冲液 opening solution (10 mM KCl, 7.5 mM iminodiacetic acid, 10 mM Mes-KOH, pH 6.15)闭合缓冲液 closure solution (20
5、 mM KCl, 1 mM CaCl2, 5 mM Mes-KOH, pH 6.15)ABA 酒精溶液【操作步骤】植物学实验报告 左 20113/41、 ABA 促进拟南芥气孔关闭在培养板上取 2 个孔，加入关闭缓冲液。拟南芥叶片下表面浸于开放缓冲液中， 置于强光下 1 小时，使气孔开放。其中一个孔加入 50 M ABA，即 Close_ABA，另一个做参照，即 Close_ethanol。置于黑暗中 1 小时，观察拍摄气孔，统计孔径。2、 ABA 抑制拟南芥气孔开放在培养板上取 2 个孔，加入开放缓冲液。拟南芥叶片下表面浸于开放缓冲液中， 置于黑暗中 1 小时，使气孔关闭。其中一个孔加入 5
6、0 M ABA，即 Open_ABA，另一个做参照，即 Open_ethanol。置于强光下 1 小时，观察拍摄气孔，统计孔径。【实验结果】ABA 调控拟南芥气孔的运动，使气孔关闭，见 Figure 2。Figure 2 ABA 促进拟南芥气孔关闭&ABA 抑制拟南芥气孔开放Close_ethanol, ABA 促进拟南芥气孔关闭的对照组，孔径 6.10m，标准差 1.47m,Close_ABA，实验组,孔径 2.73m, 标准差 1.10m,与对照组有极显著差异，p 值为 1.65174E-43；Open_ethanol, ABA 抑制拟南芥气孔开放的对照组，孔径 5.29m,标准差 1.31m,Open_ABA，实验组，孔径 2.77m,标准差 0.95m,与对照组有极显著差异， p 值为 2.49421E-植物学实验报告 左 20114/435。每个平均数都是 102 个气孔孔径的均值。【讨论】1、 本实验，我一共测了 408 个气孔的孔径。为什么是 408？因为累了，不想测更多。我觉得每个处理随机选取不同视野共测定 30 个孔径就行，实验应平行 3 次。2、 实验中气孔闭合得不完全，可能与缩短处理时间有关。
