1、实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度 100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制方法 1.称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。3.用 0.22 m 过滤膜过滤除菌。4.小份分装(1 ml/份)后，-20保存。IPTG(异丙基-D- 硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制方法 1.称 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后
2、，定容至 50 ml。3.用 0 22 m 过滤膜过滤除菌。4 小份分装(1 ml，份)后，-20保存。X-Gal (20 mg/ml)组份浓度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制方法 1.称量 l g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至 50 ml。3.小份分装(1 ml/份)后，-20避光保存。LB 培养基组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中
3、。Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1 L。5 高温高压灭菌后，4保存。TB 培养基 组份浓度配制量 1L配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH 2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解 2.31 g KH2PO4 和 l2.54 g K2HPO4 于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解 后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于 l L
4、 烧杯中。Tryptone 12 gYeast Extract 24 gGlycerol 4 m3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至 1 L 后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至 60以下时， ；加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6.4保存。SOB 培养基 组份浓度2%(W/V) Tryptone0.5%(W/V) Yeast Extract0.05%(W/V) NaCl2.5mM KCl10 mM MgCl2配制量 1 L配制方法 1.配制 250 mM KCl 溶液。在 90 ml 的去离子水中溶解 l.86 g KCl 后，定容至 10
5、0 ml。2.配制 2 M MgCl2 溶液。在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl2 后，定容至 100 ml，高温高压灭菌。3.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone 20 gYeast Extract 5 gNaCl 0.5 g4.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。5.量取 10 m1 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。6.滴加 5 N NaOH 溶液( 约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0。7.加入去离子水将培养基定容至 l L。1.2%(W/V) Tryptone2.4%(W/V) Yeast Extract0.4%(V/V)
6、Glycerol17mM KH2PO472mM K2HPOa8.高温高压灭菌后，4保存。9.使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl2 溶液。SOC 培养基 组份浓度2%(W/V) Tryptone0.5%(W/V) Yeast Extract0.05%(W/V) NaCl2.5 mM KCl10 mM MgCl220 mM Glucose配制量 100 mL配制方法 1.配制 l M Glucose 溶液。将 18 g Glucose 溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 100 ml。用 0.22 m 滤膜过滤除菌。2.向 l 00 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M
7、 Glucose 溶液 2 ml，均匀混合。3.4保存。RM 培养基 组份浓度1%(W/V) Yeast Extract0.2%(W/V) KH2PO42%(W/V) Glucose配制量 100 mL配制方法 1.配制 50% Glucose 溶液。将 200gGlucose 溶于 300 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 400 ml。用 0.22m 滤膜过滤除菌。2.向 96 ml RM 培养基中加入除菌的 50% Glucose 溶液 4ml，均匀混合。3.4保存。抗生素的贮存溶液及其工作浓度贮存液* 1 工作浓度抗生素浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒氨苄青霉素羧苄青霉素氯霉素
8、卡那霉素链霉素四环素* 250 mg/ml(溶于水) -2050 mg/mL(溶于水) -2034 mg/mL(溶于乙醇) -2010 mg/mL(溶于水) -2010 mg/mL(溶于水) -205 mg/mL(溶于乙醇) -2020 g/ml 60 g/ml20 g/ml 60 g/ml25 g/ml l70 g/mL10 g/ml 50 g/ml10 g/ml 50 g/ml10 g/ml 50 g/mL*1 以水为溶剂的抗生素贮存液应通过 0.22 m 滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。*2 镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌
9、的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB 培养基)。SDS-PAGE 浓缩胶(5%Acrylamide)配方表各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量 各种组份名称1 m1 2 m1 3 m1 4 ml 5 ml 6 m1 8 m1 10 mLH2O30%Acrylamide1.0M Tris-HCl(pH6.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED.0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.80.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 170.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0 75 1.0 l.250.01 0.02 0.03 0.04 0.05
10、 0 06 0.08 0.10.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.10.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.008 0.01SDS-PAGE 分离胶配方表各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量各种组份名称5m1 10m1 15m1 20 ml 25m1 30m1 40m1 50 ml6%GelH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED8%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCl(pH8 8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED10%G
11、eLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris+HCl(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED12%GeLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED15%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED2.6 5.3 7.0 10.6 13.2 15.9 21.2 26.51.0 2.0 3 0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.01.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.50.05 0.1 0.15 0.2 0.2
12、5 0.3 0.4 0.50. 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.004 0.008 0.01 0.004 0.008 0.012 0.015 0.02 0.024 0.032 0.042.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.21.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.31.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.0.05 0.1 0.15 0 2 0.25 0.3 0 4 0.50.003 0.006 0.009
13、 0.0l2 0.015 0.018 0.024 0.031.9 4.0 5.9 7.9 9.9 14.9 15.9 19.81.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 13.3 16.71.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0 3 0.4 0.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.002 0.004 0.006 0 008 0.01 0 .01 2 0.0l 6 0.021.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16 52.0 4.0 6.0 8.0 10.0
14、l2.0 16.0 20.01.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.05 0.1 0 15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.021.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.52.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 20.0 25.01.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 l2.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02
