1、观赏植物 组织培养之兰花,一、兰花组织培养常用于：1、无性系快速繁殖；2、茎尖培养脱毒；3、培育新品种；4、种质资源的保存；5、次生代谢产物的生产。,二、常见组织培养的兰花种类,三、兰花工业,兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。,贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的
2、快繁已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。,兰花组培的外植体,种子,茎尖,茎段,叶片,根,兰花组培的途径,原球茎途径,种子萌发时先是胚的膨大,种皮破裂,40天时肉眼可见浅黄色的原胚呈球状,称为原球茎.。兰花茎尖等外植体在组培中也可诱导产生原球茎，并且原球茎还可以切割成若干小块，分别形成新的若
3、干原球茎丛。,兰花的组织培养过程,初代培养 无菌处理,继代培养（增殖培养）,壮苗培养,生根培养,炼苗（移栽驯化）,组培中可能出现的问题,污染,变异,玻璃化,褐化,黄化,蝴蝶兰组织培养,蝴蝶兰花梗生长点组织培养,使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以，也有人将其称为切片苗。 一般来说，以花梗
4、生长点来进行组织培养，分生数量约在20棵以上，称之为花梗苗，若是以花梗生长点来进行组织培养，分生数量在20棵以上，就称为分生苗。而花梗苗与分生苗这两者它们都是属于无性繁殖。在理论上，遗传的特性与原植株的特性是一样的，但是却因为培养基的比例调配或是药物的刺激，常常会发生整批分生的植株 在形态上与原植株不同的情况。 花梗生长点组织培养具体操作：,1）将蝴蝶兰的花梗由植株上剪下，如果已开花的部份可以剪下?弃，留下未开花的节，再将花梗裁剪适当长度，再将包覆在梗节生长点外的苞片，小心的剥除，勿伤及生长点，置入超音波震荡器中，以稀释的漂白水溶液消毒。如无震荡器时，可置入装有稀释过的漂白水溶液的试管中，手动
5、的大力摇晃试管，也可达到消毒的目的。,2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身，可重覆此一动作23次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中，藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。,（3）将花梗两端切除 芽尖端切90度另一端则呈45度斜切,将切面为45度端插入培养基中,塞子消毒后塞住瓶口,瓶口处再以酒精灯消毒，覆盖上铝箔纸避免感染,成功长出新株体,消毒不彻底瓶内发霉,铁皮石斛的组织培养,铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石
6、上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐5的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。,铁皮石斛的组织培养技术路线,外植体,丛生芽,培养基,生根发育,完整植株,蔗糖：30g琼脂：6.8g,初代培养基的设计,MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.25.6】,MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：BA10ml,NAA5ml,蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml,继代培养基的设计,MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%20% 【pH值5.25.
7、6】,取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：BA5ml,NAA2ml,NAA,BA,IAA,增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。,土豆汁,香蕉汁,IBA,蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g,生根培养基的设计,1/2MS+NAA0.20.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.25.6】,取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：NAA25ml,Your Tex
8、t here,生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养，约12周后即生根，以长成完整植株。,优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段,外植体的选择,接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。,苗的高度为12cm时,丛生芽增殖倍数最高数。,生长发育健壮苗优先,1,2,3,外植体的处理,Text 1,Text 2,Text 3,摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段。,用洗洁剂清洗后置流水下冲2030 min。,在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5min后，用无菌水冲洗56次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切0.20.3cm。,接种实验,一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记,各时期的培养条件,茎段的诱导时间在511天之间 培养温度2325，光照强度2000lx，光照时间10h/d,
