1、,1.DNA的基本组成单位: 脱氧核苷酸,鸟嘌呤脱氧核苷酸,腺嘌呤脱氧核苷酸,胞嘧啶脱氧核苷酸,胸腺嘧啶脱氧核苷酸,2.脱氧核苷酸的种类：,知识重温：DNA分子的结构,平面结构,立体结构,磷酸二酯键,3.DNA分子的结构,12,限制酶的识别序列有何特点？,限制酶识别序列的特点,中轴线两侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如：GAA TTC CCC GGGCTT AAG GGG CCC,中轴线,1、EcoR（大肠杆菌的一种限制酶）能识别GAATTC序列，并切割G和A之间的磷酸二酯键。2、Sma能识别CCCGGG序列，并切割C和G之间的磷酸二酯键。,常用的两种限制酶,EcoR,黏性末端,黏性末端
2、,什么叫黏性末端？,当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA的末端带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的末端叫黏性末端。,Sma,平末端 平末端,什么叫平末端？,当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA的末端是平整的，这样的末端叫平末端。,平末端 平末端,可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。,Ecoli DNA连接酶或T4DNA连接酶,T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低,氢键,磷酸二酯键,DNA聚合酶的作用：把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段末端。,磷酸二酯键,DNA连接酶的作用：将两个双链DNA片段连接起来。,1.载体需要
3、的条件：有1多个限制酶切点（便于外源基因的插入）对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选,作为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？,霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？,假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？,目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？,三、“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体,能复制并带着插入的目的基因一起复制,有切割位点,标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。,2、基因工程中常用的载体质粒,质粒是一种裸露的、结构简单独立于细菌拟核之外、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。,在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。,质粒 噬菌体的衍生物、某些动植物病毒等,2、基因工程中常用的载体,一、基因工程的概念： 二、DNA重组技术的基本工具： 1.限制性核酸内切酶“分子手术刀”2. DNA连接酶“分子缝合针”3.基因进入受体细胞的载体“分子运输车”,课堂小结,
