1、课题2 用纸层析法分离铁离子和铜离子,叶绿素含有胡萝卜素、 叶黄素、叶绿素a、 叶绿素 b等色素，那 么如何分离、提纯叶 绿体中的色素呢？,菠菜的叶绿体中色素的提取和分离,纸层析法的应用展示：,纸层析法的原理是什么？,一、纸层析法基本原理,以滤纸作为惰性支持物，附着在纸上的水是固定相，不与水混溶的有机溶剂作为流动相。,样品溶液点在纸上，作为展开剂的有机溶剂自下而上移动，样品混合物中各组分在水或有机溶剂中的溶解能力各不相同，各组分会在水与有机溶剂两相中发生溶解分配，并随有机溶剂的移动而展开，达到分离的目的。,亲脂性强的成份在流动相中分配的多一些，随流动相移动的速度就快一些。 亲水性强的成份在固定
2、相中分配的多一些， 随流动相移动的速度就慢一些。,性质不同的组分分离在滤纸的不同位置上,具有细微缝隙的物质或直径很小的细管(称毛细管)与液体接触时，液体沿细缝或毛细管上升的现象称毛细现象。毛细现象是物质分子间作用力的结果，常见的纸张或毛巾吸水都是毛细现象。,流动相和固定相的选择,一般来说，能溶于水的待分离物质，选择水做固定相(吸附在滤纸上)，以与水不混溶的有机溶剂做流动相,毛细现象,2、裁纸,3、画原点,6、展开,7、显色,1.5cm20cm,滤纸不可触及试管的内壁，纸条末端浸入展开剂约0.5cm,不能让试样点浸入展开剂,二、操作方法,1、配制试样溶液,离滤纸末端约2cm处用铅笔,4、点样,用
3、毛细管取样品溶液，轻轻点样于原点上，晾干，重复35次。斑点直径需0.5cm,5、取展开剂,不能粘到试管壁上,约2cm,试样点,如果试样接触展开剂，样点里要分离的离子或者色素就会进入展开剂，导致实验失败。,三、纸层析法分离铁离子和铜离子,1、实验原理含有Cu2和Fe3的溶液涂在滤纸一端，丙酮作展开剂，在滤纸的毛细作用下，展开剂携带Cu2和Fe3沿滤纸纤维向上移动的速度不同，一段时间后，Cu2和Fe3距起点的距离会不同，从而达到分离的目的。,流动相：,丙酮,2、实验操作要点,（1）裁纸,（2）点样,（3）展开,（4）显色,1.5cm20cm,重复点样35次后晾干,离滤纸条一端2 cm处,滤纸不可触
4、及试管的内壁,滤纸条下端浸入展开剂中约0.5cm,为使观察效果更明显， 采用氨熏显色。,（1）层析过程中的实验现象,（2）氨熏后的实验现象,用小烧杯代替大试管。用铁丝横穿过滤纸，架在烧杯上方（如图）。调节完滤纸高度后，盖上培养皿形成气室。,氯化铁层，颜色较深,硫酸铜层，颜色稍浅,3、实验现象,上端出现红棕色， 下方出现蓝色,（1）为防止水解，饱和FeCl3和CuSO4可加少量HCl或H2SO4酸化，不影响实验效果。,4、实验注意事项,（4）滤纸吸水性很强，点样操作要求迅速。等到滤纸完全干燥以后才能再次点样。,（2）氨熏需在通风实验室内进行。,（3）层析速度开始较快，后逐渐减慢，大约10分钟即可
5、分离完全。,拓展课题12 菠菜的叶绿体中色素的提取和分离,操作步骤：,研磨、取液、点样、层析,用圆滤纸改进实验的实验现象,5分钟,20分钟,青 菜,拓展课题13 用粉笔进行层析分离,实验操作要点及主要实验现象实验操作要点 （1）配制混合液 （2）点样 （3）层析,色谱分析法：,1、简介：基于混合物各组分在体系中两相的物理、化学性能差异（如吸附、分配差异等）而进行分离和分析的方法。国际公认俄国M.C.茨维特为色谱法的创始人。,（1）按流动相和固定相的不同，色谱法分为气相色谱法和液相色谱法。气相色谱法的流动相是气体，液相色谱法的流动相是液体 （2）按吸附剂及其使用形式可分为柱色谱、纸色谱和薄层色谱。 （3）按吸附力可分为吸附色谱、离子交换色谱、分配色谱 （4）按色谱操作终止的方法可分为展开色谱和洗脱色谱。 （5）按进样方法可分为区带色谱、迎头色谱和顶替色谱。,色谱法的分类：,气相色谱法和液相色谱法,气相色谱仪,液相色谱仪,柱层析法,纸色谱法 柱色谱法 薄层色谱法,纸层析法作为一种物质分离的简单方法，是色谱分析法的一种。,薄层色谱分离 ，将固定相在玻璃平板上铺成薄层而进行分离的一种分离技术。薄层色谱是柱色谱和纸上色谱两者的结合。,作 业,实验化学作业本“纸层析法分离铁离子和铜离子”,
