1、遵义医学院珠海校区生理机能教研室,1,家兔小肠平滑肌实验 小肠运动形式的观察,主讲教师：郑衍芳 王明晓技术支持：蔡仕宁,离体组织灌流方法(了解),保证离体器官存活的条件：1.温度 2.营养 3.PH 4.酸碱度 5.渗透压 目前的离体灌流组织应用：1. 家兔 离体小肠2. 大鼠、小鼠 离体子宫3. 大鼠 离体动脉条4.豚鼠 离体气管条5.蟾蜍、蛙、大鼠 离体心脏.,实验原理,消化道平滑肌的一般生理特性：收缩迟缓：舒缩运动 20S/次。 富有伸展性：伸长可达原来长度23倍。 紧张性：常保持一种微弱的持续收缩状态。 节律性收缩：离体后于合适环境中仍能节律性收缩。 对电刺激不敏感，对化学、机械等刺激
2、敏感。,小肠平滑肌也具有上述生理特性。,实验原理和背景知识,小肠运动受到神经和体液的调节,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,4,小肠的运动形式,体液调节:胃肠激素如胃泌素、缩胆囊素、促胰液素等,神经调节:,实验目的,学习哺乳动物类离体小肠平滑肌的制备方法。 观察某些因素（温度、pH值、药物）对小肠平滑肌舒缩活动的影响。 观察哺乳动物小肠的运动形式以及神经和某些药物对其运动的影响。 掌握消化道平滑肌的一般生理特性。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,5,实验材料,动物：家兔 药品：25%氨基甲酸乙酯、台氏液、1mol/L 盐酸溶液、1mol/L NaOH溶液、0.001%乙酰胆碱溶液、0
3、.001%去甲肾上腺素溶液、1%氯化钙溶液 器材：恒温平滑肌实验装置、生物信号采集系统、张力换能器、计算机、兔台及手术器械,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,6,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,7,实验步骤,在体实验 麻醉和固定：称重，计算麻药计量（4ml/kg的25%氨基甲酸乙酯），耳缘静脉麻醉，鉴别后固定于兔台上。 腹部手术：腹部剪毛、自剑突下沿腹部正中线切开腹壁（10cm）。打开腹腔，暴露胃肠道并寻找小肠。用皮钳夹住两侧腹壁并提起形成皮兜。 观察：正常小肠的运动形式；局部滴加乙酰胆碱后小肠的运动形式；局部滴加去甲肾上腺素后小肠的运动形式。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,
4、8,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,9,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,10,实验方法,离体实验 家兔一只，处死后迅速行腹部手术。 找出胃幽门与十二指肠交界处，由此取长2030cm的肠管，不留肠系膜。 取出肠段置于室温台氏液中轻轻漂洗，去除当肠内容物，将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各用系好线的蛙心夹夹住。 将离体平滑肌连接于设定温度好温度（38）恒温平滑肌槽、张立换能器（书图7-1,p121）上。打开电脑和生物信号采集系统。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,11,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,12,张力换能器,蛙心夹,浴槽,小肠段,13,离体小肠收缩曲线代表意
5、义,收缩曲线：-上升支 舒张曲线：-下降支 基线上移：紧张性升高 基线下降：紧张性下降 幅度增加：收缩力增强 幅度减低：收缩力减弱 波峰间距：代表收缩频率,实验步骤,离体实验：观察离体小肠平滑肌的正常波形观察pH 值对小肠平滑肌的作用：浴槽内加1mol/L HCI 溶液2-4滴，观察平滑肌的反应（观察后立即冲洗和更换台氏液）。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,14,观察项目,离体实验： 乙酰胆碱的作用：浴槽内加入0.001%的乙酰胆碱溶液2-4滴，观察平滑肌的反应（观察后立即冲洗和更换台氏液）。 去甲肾上腺素的作用：浴槽内加入0.001%的去甲肾上腺素溶液2-4滴，观察平滑肌的反应（观察
6、后立即冲洗和更换台氏液）。 观察温度的影响：分别加入室温台式液、25台式液，观察平滑肌的反应。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,15,注意事项,1.实验过程中必须保证标本的供氧(通气)及浴槽内台氏液的恒温(38)。 2.灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。 3.放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。 上述各药液加入的量系参考数据，效果不明显者可以添加。 4.每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应。 5.每项处理必须有处理标记。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,16,思考题,胃肠平滑肌有哪些运动形式以及生理特性 本实验药品对小肠平滑肌的作用
7、效果及其机制。 取肠时为什么采用击昏家兔而不用在麻醉下进行? 要保持小肠平滑肌较好的活性，实验过程中要注意什么？ 制备小肠平滑肌标本时，为什么要取小肠上段，尤其是十二指肠段的平滑肌？,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,17,实验结果分析,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,18,实验结果分析,加入乙酰胆碱，可见收缩的幅度上升，基线抬高，频率加快。消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是钙内流，ACh-M受体结合，使钙通道开放，使肌浆中的钙升高，进而激活肌纤蛋白-肌凝蛋白-ATP系统，使平滑肌收缩，肌张力增加。故乙酰胆碱对小肠运动有加强作用。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,19,实
8、验结果分析,加入去甲肾上腺素可见收缩的幅度小，基线下移，频率较慢。消化道平滑肌细胞上有 两种受体，NA可作用于受体，使肌膜及肌质网上的钾离子通道开放，钾的外流增加，使膜发生超极化，肠肌兴奋性下降，肌张力下降。同时，NA还作用于受体，使肠肌膜细胞中的cAMP合成增加，肌膜及肌质网上钙外流增加，也使肌张力下降。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,20,实验结果分析,加入HCl溶液可见小肠平滑肌收缩的幅度减小，基线下移，频率较慢。可能是氢离子与钙有竞争作用，氢离子增加，使钙与肠肌细胞的钙调素（Ca-M）结合少，而使肠肌细胞的收缩力下降。 加入氢氧化钠：小肠平滑肌收缩的幅度增大，基线上移。氢氧离子
9、中和氢离子，从而削弱了氢离子与钙离子的竞争作用，使钙调素与钙离子结合数量增多所至。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,21,实验结果分析,加入氯化钙溶液可见小肠平滑肌收缩的幅度增加，基线抬高，频率加快。 细胞外液中存在较多的钙离子，而钙离子则是肌肉收缩的必要条件。平滑肌细胞兴奋肌膜被激活细胞外钙离子进入膜内，而且肌浆网释放钙离子钙离子浓度升高钙离子与钙调蛋白结合肌球蛋白激酶活化ATP分解释放能量横桥获能处于高自由能横桥牵动细肌丝滑动平滑肌收缩。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,22,实验结果分析,室温25下小肠平滑肌收缩的幅度小，频率较慢。室温下，温度较低，酶的活性下降，使代谢水平降低，兴奋性减弱，收缩的幅度小，基线下移，频率较慢。,*,遵义医学院珠海校区生理机能教研室,23,
