1、有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留的快速检测 （叶类蔬菜）,以酶技术为基础的快速检测技术,第三章,药量 频率 方法 安全间隔期 剧毒高毒,背景介绍：违规用药导致食品中农药污染,背景介绍：我国农药使用构成,有机氯，有机磷，氨基甲酸酯，拟除虫菊酯类等，我国70%为有机磷有机磷中70%为剧毒和高毒，部分蔬菜禁用,该需要通过有机溶剂提取、净化和用大型 分析仪器进行，费用高，时间长，无法对 廉价蔬菜进行随时随地或快速检测，监管不易到位,国标检测方法气相色谱法,速测卡法速测卡法酶抑制率法分光光度法,快速检测方法GB/T5009.199-2002,速测卡法原理,胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（
2、蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。,操作步骤-表面测定法（粗筛法）,1、擦去蔬菜表面泥土，滴23滴缓冲溶液在蔬菜表面， 用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。 2、 取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 3、 放置10min以上进行预反应，有条件时在37恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 4、 将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合反应。 5、 每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。,操作步骤-整体测定法,1、选取有代表性
3、的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，震摇50次，静置2min以上 2、取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润 3、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合反应 4、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡,白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果 白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果 对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量,结果判定（与空白对照卡比较）,结果判定,阴性,弱阳性,
4、强阳性,检出限（mg/kg）,植物次生物质：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭 白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物 质，容易产生假阳性。处理这类样品时，不要剪的太碎， 可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。 叶绿素：含叶绿素较高的蔬菜，也不要剪的太碎，同样 可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。,说明,当温度条件低于37C，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手指捏3分钟时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有 可比性。红色药片与白色药片叠合反应的时间以3分钟为 准，3
5、分钟后蓝色会逐渐加深，24小时后颜色会逐渐退去空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲溶液加的少 、预反应后的药片表面不够湿润 ，二是温度太低。,说明,如果蔬菜中在种植过程中使用了超标地混配农药，在检测中发现的有机磷和氨基甲酸酯农药残留超标并不代表其中每一种农药均超标，有可能每一种农药均不超标而只是各种农药累加后超标。水果中有机磷和氨基甲酸酯农药残留检测可以参考本方法,说明,环境清洁度的检测 ATP荧光光度法,以酶技术为基础的快速检测技术,第三章,在厨房、食品销售柜台等场所操作前，为最大限度降低食品污染的风险，对厨房设施进行有效清洁是非常必要的。 为使食物准备区域达到清洁要求，就必须将微生物数
6、目降到较低水平,并且将食物残渣清除。因为残留表面的食物残渣将成为孳生微生物的温床，因此如果不能将其检出，则会影响食物的质量和安全性。 ATP快速洁净度检测能同时检测是否存在有微生物和食物残渣，并且能在一分钟内提供检测结果。这样即使当检测结果显示相关设施清洁不合格时，也可以迅速采取补救措施。 使细菌检查的工作量大幅度减轻，实现卫生监控的简捷化、效率化 应用于HACCP的关键环节监测,环境洁净度及其ATP检测意义,外观和结构,手持式ATP荧光光度计,台式ATP荧光光度计,2005年4月-上海第48届世界乒乓球锦标赛赛事保障,2005年5月-宁波中国女排宁波 主场赛事保障,2006年6月-上海合作组
7、织六国峰会食品安全保障,重大活动食品安全保障中的应用,什么是ATP,ATP三磷酸腺苷【adenosine triphosphate，C10H16N5P3O13】存在于所有生物体中，在细胞内主要作用是提供能量 通过检测ATP ，可以间接地证明生物体的存在,ATP检测技术应用（国外）,20世纪80年代，英国首先研制出便携式ATP检测仪 随后在欧洲、美国、日本展开应用 应用范围涉及食品加工、超市和饮食行业 检测内容包括微生物和食品残渣,检测技术应用（国内）,20世纪末，ATP检测技术被引进我国 当时，除个别省级卫生监督单位装备，主要在一些外资、合资企业用于自检 2002年我国卫生部颁发了食品加工企业
8、的HACCP实施指南，鼓励食品加工企业引入ATP检测技术 2005年3月卫生部新出台卫生监督机构建设指导意见，要求省、市、地配置,ATP检测反应原理,光（RLU）,荧光素酶 O2+Mg2+,氧化荧光素 PPi+AMP,荧光光度计测量,细胞 数量,D-虫荧光素,ATP,微生物,植物,动物,灵敏度高 10-1510-18 mol/L 速度快 常规培养法18-24h以上，而ATP只需要几分钟 可行性 微生物数量与微生物体内所含ATP有明确的相关性。 通过检测ATP含量，可间接得出反应中微生物数量 可操作性 传统培养方法需在实验室由经过培训的技术人员进 行操作；而ATP快速洁净度检测操作非常简便，只需
9、简单的培训即可由一般工作人员进行现场操作,ATP检测反应特征和优势,使用方法,拭抹表面以获取标本,如需获得清洗水溶液标本，则将棉拭子浸入水中3到4秒钟。,第一步涂抹【SWAB】,将拭子插入检测管，用拇指和中指捏住球管，从吸阀处折断；轻挤球管两次，挤出球管内液体。,2,使用方法,第二步折断和挤压 【 SNAP AND SQUEEZE 】,将检测管放入ATP荧光检测仪中，盖上盖子，倒计时开始并检测。,使用方法,第三步插入和检测 【 INSERT AND DETECT 】,ATP检测产品,英国 Hygiena System-II 英国 Biotrace 德国 Merck HY-LiTE 2系统 美国
10、 NHD PROFILE 1 3560 10X 美国 Neogen AccuPoint系统 美国 AMSALite III ATP分析仪 日本 KIKKOMAN,LUMT清洁程度快速检测,取样,混合,检测, 30秒获得结果,ATP荧光检测与常规培养法的关系,检测结果RLU读数与常规培养法结果CFU，不能直接对比，但有80%-90%的相关性，两者结果没有统计学显著差异 与常规培养检测法配合使用，可用ATP检测法检测污染，而用培养检测法鉴定污染物种类，污染源,重点检测对象,餐具 刀具 量具 食品架（熟食） 熟食品加工器械（不锈钢等） 不锈钢食品容器（碗、滤网等） 不锈钢器具（勺子、搅拌器等） 砧板
11、（塑料） 手（直接接触食品，认真清洗后） 其他,直 接 入 口 食 品 接 触 表 面,试剂需冷藏保存 标准拭抹是拭抹一个10cm10cm的区域。但这常常并不能实现，比如填满物体的顶端部位。因此最重要的是保证对每个控制点的每次检测都采用连续一致的方法。 拭抹的关键控制点应考虑从易清洁到难清洁的区域范围，比如水平桌面、接缝、凹陷区域、混合机桨叶等。 不要用手接触拭子，确保拭子只与要检测的表面接触。,注意事项（一）,注意事项（二）,如需检测的控制点有肉眼可见的污垢，就不要再浪费拭子去评估其洁净度。拭子只用来检测看起来洁净的表面 不要直接拭抹液体。如果待检表面有多余液体存在，应等10分钟左右直至液体稍许干燥后再进行检测。即表面湿润干燥皆可，无需特别干燥 拭子头事先已被缓冲液润湿，有助于从干燥表面提取ATP,即食食品直接接触表面（砧板） 检测结果判断和推荐使用的限定值,30RUL,30100RUL,100RUL,结果,判断,显示,措施,不需采取行动,检查清洁步骤是否被正确执行,保证清洁步骤的正确执行重新审查清洁步骤更换设施（比如砧板、塑料碗）,部分高危区域（如熟食区）通过/不通过限制值参考一,部分高危区域（如熟食区）通过/不通过限制值参考二,出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法 出口食品中大肠杆菌(葡萄糖苷酶荧光)检验方法,以酶技术为基础的快速检测技术,第三章,
