1、蟾蜍离体坐骨神经 腓肠肌标本制备,Sciatic-gastrocnemius Preparation of Toad,蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，因此在生理学实验，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经-腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。 制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的基本操作技术之一。,【目的要求】,1. 学习蛙类动物单毁髓和双毁髓的方法。 2. 掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。,【基本原理】,两栖类动物生存环境较简单，离体组织或器官所要求的条件也
2、较简单。坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制的任氏液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。 若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一次。,【动物和器材】,蟾蜍或蛙； 任氏液； 常规手术器械； 毁髓针、锌铜弓、解剖盘、玻璃分针、培养皿、烧杯、滴管、蛙板、蛙钉等。,【步骤】,双毁髓 剥制后肢标本 分离两后肢 分离坐骨神经,分离股骨 游离腓肠肌 检验标本,1、双毁髓,左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处
3、即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔（进针深度约2mm，有脱空感即到达椎管），然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以毁脑组织。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物（pithed toad） 。,2、剥制后肢标本,剪除躯干上部及内脏：左手持手术镊提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。用金冠剪在颅骨后方剪断脊柱。左手握住蟾蜍下肢，大拇指抵住脊柱尾骨，右手用粗剪刀沿脊柱两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干上
4、部及内脏组织，弃于烧杯内。,剥皮：避开神经，左手持镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。然后洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。,3、分离两后肢,将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。,4、分离坐骨神经,将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用大头针将标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝胫神经分叉处。剪断盖在坐骨神
5、经上方的梨状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。,5、分离股骨,沿膝关节剪除并刮净股骨周围的肌肉，保留股骨的后2/3，剪断股骨。 注意：勿剪断坐骨神经。,6、游离腓肠肌,在腓肠肌跟腱下穿线并结扎，提起结扎线，剪断肌腱与胫腓骨的联系，游离腓肠肌，剪去膝关节下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的联系，制备出完整的坐骨神经-腓肠肌标本。 标本应包括：坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨四部分。,7、检验标本,将制备好的标本浸泡到任氏液中5-10min，待其功能稳定后，用任氏液沾湿的锌铜弓的两极接触神经，如腓肠
6、肌迅速发生收缩，则标本机能正常。 依次用温热的玻璃棒和食盐的接触和洗脱检验肌肉收缩的变化。,【注意事项】,1）双毁髓时应注意捻动探针并使蟾蜍头部前俯，防止耳后腺分泌物射入实验者眼内，如被射入，应立即用生理盐水冲洗眼睛。 2）标本制备过程中应经常滴加任氏液，防止标本干燥，以保持正常生理活性。 3）避免污染、过度牵拉或用器械夹伤坐骨神经和腓肠肌。,思考与讨论,（1）用锌铜弓刺激坐骨神经如何引起腓肠肌收缩？ （2）如何保持离体标本的机能正常？ （3）剥去皮肤的后肢标本能用自来水冲洗吗？,探索性问题,1该标本可以进行哪些实验研究？试设计实验内容。 2你认为该标本的制作方法有哪些需要改进的地方？请说出你的想法。,下次实验,刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的关系,
