1、物品和物体表面消毒效果监测1、采样方法 (1）采样时间：消毒处理后医疗操作前。 (2）采样面积：被采表面小于 100cm，时，取全部表面；被采表面大于等于 100cm时，取 100cm。 (3）采样方法：将 5cm5cm 灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的棉试子一只，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转动棉试子，剪去手接触部位，将棉试子放入装有10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的试管内，在试管上标明科室、检品所在房间和物品或物体表面的名称及采样面积，立即送至检验科细菌室。若采样面积大于等于 100cm，应连续采样四个点（即采样
2、 100cm） 。2、检验方法 (1）细菌总数检测cfu /cm：将试管内的棉试子用力振打 80 次，无菌操作吸取 1.0ml 接种于灭菌平皿内，加入溶化冷至 45 一 48 的营养琼脂 15 一 18ml，边倒入边摇匀，待凝固后放入 37 培养箱培养 48h ，计数菌落数 cfu / cm。计算：cfu/cm=平板上菌落数稀释倍数采样面积 (cm) ，不规则物品或物体表面报告单位为 cfu件。 (2）致病菌检测 检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测。 金黄色葡萄球菌检测取采样液 1.0ml ，接种于 5ml SCDLP 液体培养基中361增菌 24h取 1 白金耳环上述增菌液
3、，在血平板上作划线分离36培养 24h观察菌落特征鉴定报告。乙型溶血性链球菌检测取样品 1.0ml，接种于 1葡萄糖肉汤37 增菌 24h取 1 白金耳环增菌液在血平板上作划线分离361培养 24h观察菌落鉴定报告。沙门氏菌属、志贺氏菌属、非发酵菌群等致病菌的检测参照相关检测方法。 (3）报告：报告细菌总数（cfu/ cm）和是否检出致病菌及致病菌菌种（金黄色葡萄球菌、 一溶血性链球菌、沙门氏菌属、志贺氏菌属、非发酵菌群等） 。 3、注意事项 (1）严格遵守无菌技术操作规程。 (2）门把手等不规则的物体表面用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉试子直接涂擦采样。手和皮肤粘膜消毒效果监测1、采样方法
4、 (1）采样时间：在消毒后立即采样。 (2）手的采样：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次（一只手涂擦面积约 30cm） ，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂十洗脱液）试管内，在试管外壁标明科别、姓名，立即送检。(3）皮肤粘膜采样：用 5cm5cm 的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的
5、无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的试管内，在试管外壁标明科别、姓名、采样部位、采样面积，立即送检。 (4）不规则的粘膜皮肤处可用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）棉拭子直接涂擦 5 次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂洗脱液）的试管内，在试管外壁标明科别、姓名、采样部位，立即送检。 2、检测方法 (1）细菌总数检测将采样管在混匀器上振荡 20s 或用力振打 80 次，用无菌吸管吸取 1.0ml 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种 2 个平皿，内加入已溶化的4548的营养琼脂 15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置 36
6、士 1 温箱培养 48h ，计数菌落数。计算：细菌总数（cfu/ cm) 平板上菌落数稀释倍数采样面积不规则粘膜皮肤报告单位为细菌总数（cfu件） (2）致病菌检测按照物品和物体表面消毒效果监测中的致病菌检测方法操作。 (3）报告报告细菌总数cfu /cm和是否检出致病菌金黄色葡萄球菌、 一溶血性链球菌、沙门氏菌属、志贺氏菌属等 。若检出致病菌，需报告菌种。 3、注意事项 (1）严格遵守无菌技术操作规程。 (2）两只手采样面积约 60cm 。使用中的消毒剂和灭菌剂细菌污染监测1、采样方法把被检样品充分混匀，用无菌吸管吸取消毒液 1 . 0ml ，加入到 9.0ml 含相应中和剂的无菌生理盐水采
7、样管中混匀，在试管上标明科别、样品所在室、样品名科（含浓度） 、用途，立即送检。报告细菌总数（cfu / ml ）和是否检出致病菌 金黄色葡萄球菌、 一溶血性链球菌、沙门氏菌属、志贺氏菌属等 。若检出致病菌，需报告菌种。 2、检测方法 (1）细菌总数检测 涂抹法：把待检样品充分混匀，用无菌吸管吸取上述溶液 0.2ml ，滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做 2 个平行样，一平板置 20 培养 7d ，观察霉菌生长情况，另一个平板置 35 温箱培养 72h 记数菌落数。 倾注法：把待检样品充分混匀，用无菌吸管吸取消毒液 1.0ml ，加入到9.0ml 含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别
8、取 0.5ml 放入 2 只灭菌平皿内，加入己熔化的 4548oC 的营养琼脂 15ml18ml ，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置 20 培养 7d ，观察霉菌生长情况；另一个平板置361 培养 72h ，计数菌落数。计算:倾注法 消毒灭菌剂染菌量（cfu /ml）=每个平板上的菌落数20 涂沫法 消毒灭菌剂染菌量（cfu /ml）=每个平板上的菌落数50 (2）致病菌检测按照物品和物体表面消毒效果监测中的致病菌检测方法操作。(3)报告报告细菌总数（ cfu /m1）和是否检出致病菌（金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌属、志贺氏菌属等 。若检出致病菌，需报告菌种。 3、注意事项严格遵守无菌技术操作规程。
