1、1超氧化物歧化酶（SOD ）标准曲线测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途超氧化物歧化酶（Superoxide ismutase，SOD）标准曲线测定试剂是一种旨在通过比色测定高度可溶性的四唑盐在超氧化物阴离子的还原作用下产生的水溶性甲臢染料所获得的吸光值，来对应构建已知超氧化物岐化酶活性单位标准曲线的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞和组织样品中超氧化物歧化酶实际活性单位计算的参照依据。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景超氧化物岐化酶（SOD） ，是体内的重要金属酶抗氧化剂，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢（H2O2）和分
2、子氧（O2） 。超氧化物歧化酶活性检测试剂使用高度水溶性的四唑盐:WST-1（2-（4-Iodophenyl）-3- （4-nitrophenyl ） -5-（2,4-disulfophenyl ）-2H-tetrazolium，monosodium salt）；2-(4碘苯基)-3- （4 硝基苯基）-5-（2,4-苯二磺酸）-2H-四唑单钠盐 。WST-1 灵敏度高，氧化态的吸光度低，呈浅黄色，水溶性好，可以 100%被 SOD 抑制，检测不受 pH 影响，背景噪音低。WST-1 被 O2 还原（呈现深黄色）的还原率和黄嘌呤氧化酶的活性成线性关系，该反应能被超氧化物岐化酶（SOD）抑制（完
3、全抑制，WST-1 呈现无色） 。利用 SOD 能抑制 WST-1 和 O2 的氧化还原能力来测定 SOD 的活性（波长为 450nm的比色分析） 。产品内容反应液（Reagent A） 10 毫升染色液（Reagent B） 50 微升催化液（Reagent C） 25 微升稀释液（Reagent ） 2 毫升补充液（Reagent E） 1 毫升标准液（Reagent F） 200 微升产品说明书 1 份保存方式保存在20冰箱里； 染色液（Reagent B） ，避免光照，有效保证 6 月用户自备1.5 毫升离心管：用于反应液配制的容器2.2 毫升离心管：用于反应液配制的容器酶标板或比色皿
4、：用于比色分析的容器酶标仪或分光光度仪：用于比色分析2实验步骤实验开始前，将20冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出 2 毫升 反应液（Reagent A）到新的 2.2 毫升离心管，加入 10 微升 染色液（Reagent B） ，轻柔混匀后，置于暗室里，标记为 染色工作液。然后移出 200 微升 稀释液（Reagent ）到新的 1.5 毫升离心管，加入 5 微升 催化液（Reagent C） ，轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为 催化工作液。然后进行下列操作。一、二倍法系列稀释1 设定好酶标仪并预热：波长 450nm2 取出待测的 标准液（Reagent F） ，置于冰槽里3 准备
5、 1 个 96 孔板，做好 1 至 5 号标记，置于冰槽里4 按下列顺序依次加入下列反应液到 96 孔板的标记样品孔里：1） 分别移取 20 微升 稀释液（Reagent ）到 96 孔板的 2 至 5 号孔里2） 移取 40 微升 标准液（Reagent F）到 96 孔板的 1 号孔里3） 用 200 微升枪头抽去 20 微升 1 号孔里的 标准液（Reagent F ）到 96 孔板的 2 号孔里4） 用 200 微升枪头上下抽吸混匀 2 号孔5） 用 200 微升枪头抽去 20 微升 2 号孔里含有 标准液（Reagent F ）的稀释液到 96 孔板的 3 号孔里6） 用 200 微
6、升枪头上下抽吸混匀 3 号孔7） 用 200 微升枪头抽去 20 微升 3 号孔里含有 标准液（Reagent F ）的稀释液到 96 孔板的 4 号孔里8） 用 200 微升枪头抽去 20 微升 4 号孔里含有 标准液（Reagent F ）的稀释液，扔掉9） SOD 实际浓度见下表管号 稀释液（Reagent ）标准液（Reagent F）SOD 浓度（单位/毫升）1 0 微升 40 微升 122 20 微升 20 微升 1 号管 63 20 微升 20 微升 2 号管 34 20 微升 20 微升 3 号管 1.55 20 微升 0 0二、建立反应体系1 分别加入 200 微升含有 反应
7、液（Reagent A）和 染色液（Reagent B）的 染色工作液到 96 孔板的 1 至 5 号孔里2 分别加入 20 微升含有 催化液（Reagent C）和 稀释液（Reagent ）的 催化工作液到 96 孔板的1 至 10 号孔里三、标准样品测定1 轻轻摇动 96 孔板，混匀反应液2 放进 37培养箱孵育 20 分钟，避免光照3 即刻放进酶标仪检测，波长为 450nm3四、构建 SOD 标准曲线 1 横座标（x 轴）为每毫升 SOD 单位浓度2 纵坐标（y 轴）为标准样品读数（吸光单位 OD 值）3 根据测得数据构建曲线注意事项1 本产品为 5 次操作2 操作时，须戴手套3 操作时，须在 4下进行4 染色液（Reagent B）为浅黄色，如果有结晶析出，放进 37温育数分钟即可。 染色液（Reagent B）一旦被还原，呈现可见黄色或深黄色；如果含有 SOD，则会呈现为无色5 孵育时，避免光照6 孵育后即刻比色测定7 样品 SOD 实际活性单位定义：每毫克样品蛋白或每毫升样品含有 X 单位 SOD 量8 标准液（Reagent F）的活性单位定义为 25温度，pH7.8 的条件下，抑制 50%在黄嘌呤氧化酶参与的反应系统中，WST-1 和 O2 之间的氧化还原能力9 本公司提供系列超氧化物歧化酶分析试剂产品 质量标准1 本产品经鉴定性能稳定2 本产品经鉴定检测敏感
