1、米氮平影响老年脑卒中大鼠 NF 释放的 机制 魏春杰 田嘉莹 于佳楠 杨晓玉 盖昱辛 盛宝英 王 增冕 佳木斯大学附属第一医院神经三科 摘 要： 目的 探讨米氮平在老年脑卒中大鼠核因子 (NF) 释放中的机制。方法 选取 2014年4月至2016年6月佳木斯大学附属第一医院进行动物实验老年脑卒中大 鼠180 只, 建立老年大鼠脑卒中后抑郁大鼠模型, 采用随机数字方法分为模型 组、对照组和实验组, 各60只。建模成功后, 模型组不采取任何措施, 对照组 采用疏肝解郁胶囊治疗, 实验组采用米氮平治疗, 比较三组临床疗效及 NF释放 机制。结果 三组大鼠均取得造模成功。实验组治疗后大鼠精神状况良好,
2、 毛色 光泽良好, 能正常饮水、活动幅度相对较大。对照组治疗后大鼠精神状况一般, 毛色无光, 基本能饮水, 活动幅度较小。大鼠治疗 2、7及16 d后, 实验组旷野 试验结果与对照组和模型组比较, 差异有统计学意义 (P0.05) . Conclusions Mirtazapine is an ideal treatment for elderly stroke rats. It can block the alpha 2 receptor, increase the release of NF, produce antidepressant and anxiolytic effects, a
3、nd is worthy of popularization and application. Keyword： Mirtazapine; Shugan Jieyu capsule; Senile stroke rats; Nuclear factor; Release; 脑卒中抑郁 (poststroke depression, PSD) 是指机体某次卒中后伴发的抑郁, 患者发病后除了伴有不同程度的神经功能缺损外, 还会引起情绪低落、消极悲 观、意志缺乏等, 对于症状持续 2种以上患者则属于继发性抑郁1。随着我国 人口老龄化的日益加剧, 导致我国脑卒中发生率呈现上升趋势, 且脑卒中患者 中2
4、0.0%79.0%患者伴有抑郁症状, 从而进一步加剧疾病, 影响患者健康2。 目前, 临床上对于 PSD发病机制缺乏统一标准, 普遍认为由于中枢神经系统内 多巴胺能神经递质, 并且与去甲肾上腺素和 5-羟色胺代谢关系密切。米氮平是 脑卒中抑郁患者中常用的治疗药物, 该药物属于是一种新型的拮抗剂, 但是药 物机制尚不完全知晓3-4。 为了探讨米氮平在老年脑卒中大鼠核因子 (nuclear factor, NF) 释放中的机制及基础性, 进行 NF释放机制的研究, 报道如下。 1 材料与方法 1.1 动物来源 选取2014年4月至2016年6月佳木斯大学附属第一医院进行动物实验老年脑卒 中大鼠18
5、0只, 雌雄隔板, 体重180220 g, 平均 (20020) g, 所选动物均由 佳木斯大学附属第一医院医院动物实验中心提供, 许可证编号:SYXK (黑) 2016-014。实验过程中对大鼠饲养、处理均符合关于善待实验动物的指导下意 见5-6相关规则。所有试验均通过佳木斯大学附属第一医院动物委员会批准 同意, 喂养动物房间通风良好, 昼夜12 h采光, 恒温、横湿, 定期采用紫外线 消毒。采用随机数字方法分为模型组、对照组和实验组, 各60例。 1.2 试验方法 1.2.1 模型建立 三组大鼠均禁食24 h, 称重后采用浓度为10.0%水合氯醛腹腔注射麻醉, 待麻醉 生效后将大鼠仰卧固定
6、在手术台上, 对手术部位进行常规备皮、 消毒, 沿着颈部 正中纵行切开一条长为1.52.0 cm的手术切口, 采用弯镊钝性分离皮下组织, 充分暴露, 分离迷走神经、CCA 主干, CCA分叉等, 将其中一条作为牵引线, 利 用血管钳提起牵引线到右侧防线, 同时按压其他部位, 结扎7。将该状鱼线从 CCA分叉部位推入 ICA, 待存在阻力后松开夹闭的动脉, 观察切口部位是否存在 活动性出血, 处理损伤组织边缘后缝合切口。术后大鼠静滴 40 000 U 青霉素预 防感染, 从而建立大鼠脑卒中模型, 见图18-9。 图1 大鼠脑卒中模型建立 Fig.1 Establishment of stroke
7、 model in rats 下载原图 注:A为线栓法插入线阻断血流;B为血流阻断后逐层缝合切口。 采用“孤养法+皮下注射利血平法”制备PSD 模型10-11。 将制备的脑卒中大鼠 单笼饲养, 每天背部皮下注射 4 mg/kg利血平, 每天1次, 连续注射 16 d, 对 于大鼠处于抑郁状态、精神萎靡、毛色无光, 说明模型建立成功, 见图 2。 图2 大鼠造模后形态 Fig.2 Shape after rat model 下载原图 注:A为孤养大鼠并背部皮下注射利血平后即刻;B为成功建模后的大鼠抑郁模 型。 1.2.2 处理方法 三组均适应性喂养 1周, 喂养期间大鼠自由饮食、饮水。模型组建模
8、成功后不采 取任何措施, 常规饲养, 自由饮食。对照组采用疏肝解郁胶囊治疗方法:将 0.412 5 g/kg疏肝解郁胶囊 (河南康祺药业股份有限公司, 生产批号:20145351) 溶解与2 m L蒸馏水中灌胃, 每天1次, 连续灌胃 16 d (1个周期) 。实验组采 用米氮平方法:将15 mg 米氮平 (浙江华海药业股份有限公司, 国药准字 H20031106) 溶解在2 m L蒸馏水中灌胃, 每天1次, 连续灌胃16 d (1个周期) 。 1.3 观察指标 (1) 形态观察:观察三组造模后大鼠形态, 包括:精神状况、毛色、饮水、活动情 况等。 (2) 旷野试验:三组大鼠治疗2、7及 16
9、 d后将大鼠放置在长 75 cm、宽 75 cm、高50 cm的箱中, 将其分为25个方格, 将大鼠放置其中, 记录大鼠后肢 直立分数 (包括水平运动和垂直运动) 12-13。 (3) 糖水消耗试验:三组大鼠 治疗2、7及16 d后将每只大鼠放置在独立的笼中, 给予1瓶1%糖水, 1 h后取 水定量, 记录三组糖水消耗14。 (4) 观察三组 NF水平。 1.4 统计学分析 采用SPSS18.0软件进行统计学分析, 计量资料以 表示, 比较采用 t 检验, P0.05) ; 治疗后实验组NF水平与对照组和模型组比较, 差异有统计学意义 (P0.05) , 对照组NF水平与模型组比较, 差异有统
10、计学意义 (P0.05) , 见表 3。 表3 三组治疗前后 NF水平比较 levels befor 下载原表 3 讨论 脑卒中是临床上常见的疾病, 而PSD则是脑卒中患者发病后常见的并发症, 患 者发病后如果不采取积极有效的方法治疗, 将会诱发其他疾病, 严重者将会引 起紧张、抑郁等, 甚至发生自杀, 影响患者健康。脑卒中患者发病后由于认知功 能障碍及抑郁等相互交替, 将会引起患者生活质量降低, 增加患者躯体、 精神上 痛苦, 也会增加患者社会负担。目前, 临床上对于 PSD尚缺乏理想的治疗方法, 常规药物主要以疏肝解郁胶囊为主, 该药物虽然能改善患者症状, 但是长期疗 效欠佳, 预后较差,
11、 难以达到预期的治疗效果15。 近年来, 米氮平在 PSD患者中得到应用, 且效果理想。 米氮平属于一种新型的强 效中枢性2肾上腺素能受体拮抗剂及突触后5-HT2以及5-HT3拮抗剂, 患者用 药后药物能实现2 受体的阻断, 从而能提高机体内 NF的释放, 阻断中枢 5-HT2 及 5-HT3受体, 发挥良好的抗抑郁、抗焦虑作用, 并且治疗后能改善机体 睡眠, 减轻机体不良反应。为了进一步验证米氮平在老年脑卒中大鼠 NF释放中 的机制, 本研究首先完成脑卒中大鼠模型建立, 并采用“孤养法+皮下注射利血 平法”制备 PSD模型。三组大鼠均取得造模成功。实验组治疗后大鼠精神状况良 好, 毛色光泽良
12、好, 能正常饮水、活动幅度相对较大。对照组治疗后大鼠精神状 况一般, 毛色无光, 基本能饮水, 活动幅度较小。 由此看出:利用孤养法+皮下注 射利血平法能成功制备 PSD动物模型, 能为后续试验的顺利进行奠定基础。NF 是公认的能够通过共激活多个炎症性基因来扩大疾病特异性炎症过程通用的永 久机制, 通过对三组大鼠给予不同的措施进行干预, 并且对NF水平进行测定, 结果显示:实验组治疗后 NF水平与对照组和模型组比较, 对照组治疗后 NF水平 与模型组比较, 差异均有统计学意义。由此看出:米氮平的使用有助于提高 NF 水平, 从根本上改善大鼠症状, 促进早期恢复。 米氮平分子结构中无与三环类抗
13、抑郁药抗胆碱能不良反应相关的基本侧链, 不具有5-HT再摄取作用, 药物安全 性较好, 用药后药物能进一步提高机体内 NF 水平, 并且药物清除半衰期为 2040 h, 35 d 基本可以达到稳态, 能快速控制抑郁、焦虑等症状。此外, 米 氮平还能作用于H受体, 能改善机体睡眠作用, 药物同样适用于失眠者, 能激 活去甲肾上腺素系统, 具有唤醒作用, 并不会引起持续的镇静作用16。但是, 临床上对于单一采用米氮平效果不理想者, 则应该联合其他方法治疗, 发挥不 同药物优势, 促进患者早期恢复。 综上所述, 与疏肝解郁胶囊治疗相比, 老年脑卒中大鼠采用米氮平治疗效果理 想, 能阻断 2受体, 增
14、加NF 的释放, 产生抗抑郁和抗焦虑作用, 值得推广应 用。 参考文献 1肖晴, 何肖龙, 张文炳, 等.卡博替尼阻断小鼠体内产单核细胞李斯特菌感 染的实验研究J.南方医科大学学报, 2016, 36 (1) :56-60.Xiao Q, He XL, Zhang WB, et al.Cabozantinib inhibits Listeria monocytogenes infection in miceJ.J South Med Univ, 2016, 36 (1) :56-60. 2欧阳春, 张里克, 卢远航, 等.TAK1抑制剂对糖尿病大鼠 MAPK与 NF-B信 号通路的影响及其对肾
15、脏保护机制J.中国比较医学杂志, 2017, 27 (1) :67-72.Ou YC, Zhang LK, Lu YH, et al.Regulatory effect of TAK1inhibitors on MAPK and NF-B signaling pathway in diabetic rats and its renal protection mechanismJ.Chinese Journal of Comparative Medicine, 2017, 27 (1) :67-72. 3Berlim MT, Broadbent HJ, Van den Eynde F.Blind
16、ing integrity in randomized sham-controlled trials of repetitive transcranial magnetic stimulation for major depression:a systematic review and meta-analysisJ.Int J Neuropsychopharmacol, 2013, 16 (5) :1173-1181. 4李雅丽, 张巧俊, 袁海峰, 等.罗格列酮对自发性高血压大鼠海马区 MCP-1、 COX-2、NF-B表达的影响及其机制J.西安交通大学学报:医学版, 2015, 36 (5
17、) :614-618.Li YL, Zhang QJ, Yuan HF, et al.Effects of rosiglitazone on MCP-1, COX-2 and NF-B expressions in spontaneously hypertensive ratsJ.Journal of Xian Jiaotong University:Medical Sciences, 2015, 36 (5) :614-618. 5朱洪竹, 阮晓娟, 朱梅菊, 等.运动训练对2型糖尿病大鼠肾脏 NF-B-p65 和相关蛋白表达的影响及机制研究J.体育科学, 2016, 36 (8) :50-
18、55.Zhu HZ, Ruan XJ, Zhu MJ, et al.The effects and mechanism of exercise training on the expression of NF-kappa B-p65 and related proteins in kidney Tissue of type 2 diabetes ratsJ.China Sport Science, 2016, 36 (8) :50-55. 6Fried PJ, Rushmore RJ, Moss MB, et al.Causal evidence supporting functional d
19、issociation of verbal and spatial working memory in the human dorsolateral prefrontal cortexJ.Eur J Neurosci, 2014, 39 (11) :1973-1981. 7陈佳, 李国扬, 张晓云.急性脑卒中并发肺部感染的致病菌及相关危险因素 的分析J.热带医学杂志, 2015, 15 (5) :667-669.Chen J, Li GY, Zhang XY.The pathogen of acute cerebral stroke complicated with pulmonary inf
20、ection and investigation on related risk factorsJ.J Trop Med, 2015, 15 (5) :667-669. 8Anne MF, W GT, Deborah AM, et al.Heterogeneity of severe asthma in childhood:confirmation by cluster analysis of children in the National Institutes of Health/National Heart, Lung, and Blood Institute Severe Asthma
21、 Research ProgramJ.J Allergy Clin Immunol, 2011, 127 (2) :382-389.e1-13 9郭彩霞.阿奇霉素经 TLR-4/NF-B信号通路干预 COPD大鼠炎症的机制研究 J.重庆医学, 2016, 45 (12) :1612-1615.Guo CX.Azithromycin for intervening with inflammation in rat with chronic obstructive pulmonary disease via TLR-4/NF-B signal pathwayJ.Chongqing Medicine
22、, 2016, 45 (12) :1612-1615. 10陈永欣, 卢春远, 吕淑娟, 等.满天星异荭草苷对 CCl_4致肝纤维化大鼠 NF-B 信号通路的影响J.中药材, 2016, 39 (10) :2318-2323.Chen YX, Lu CY, Lv SJ, et al.The Effect of Isoorientin-2“-O-a-L-Arabinopyranosyl (IOA) on NF-B Pathway on CCl4-Induced Hepatic Fibrosis in RatsJ.Journal of Chinese Medicinal Materials, 20
23、16, 39 (10) :2318-2323. 11李春华, 顿秀茹, 吴海艳, 等.中西医结合治疗脑卒中后抑郁临床研究J. 中医学报, 2014, 29 (1) :106-107.Li CH, Dun XR, Wu HY, et al.Clinical Research of Combined Treatment of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine in Treating Poststroke DepressionJ.China Journal of Chinese Medicine, 2014, 29 (1) :106-
24、107. 12张国玲, 杨桂梅.乌灵胶囊联合氟西汀治疗脑卒中后抑郁障碍和神经功能缺 损的临床疗效J.黑龙江医学, 2015, 39 (2) :179-180.Zhang GL, Yang GM.Efficacy of Wuling Capsule Combined with Fluoxetine in Treating Post-Stroke Depression and Neurological DefectsJ.Heilongjiang Medical Journal, 2015, 39 (2) :179-180. 13侯君.氟西汀联合佐匹克隆治疗脑卒中后抑郁伴失眠 33例疗效观察J.湖
25、北科技学院学报:医学版, 2016, 28 (2) :124-125.Hou J.Efficacy of fluoxetine combined with zopiclone in the treatment of post-stroke depression with insomnia in 33 casesJ.Journal of Hubei University of Science and Technology:Medical Sciences, 2016, 28 (2) :124-125. 14李永涛, 文军, 李淼, 等.米氮平联合舒肝解郁胶囊治疗卒中后抑郁疗效观 察J.河北医药,
26、 2015, 37 (7) :1037-1040.Li YT, Wen J, Li M, et al.Mirtazapine Combined with Shuganjieyu capsule in the treatment of post-stroke depression:a clinical experience ofJ.Hebei Medical Journal, 2015, 37 (7) :1037-1040. 15文军, 李永涛, 李淼, 等.脑卒中后抑郁症患者 100例临床治疗效果观察 J.临床合理用药杂志, 2015, 8 (16) :122-123.Wen J, Li YT
27、, Li M, et al.The effect of clinical treatment on 100cases of post-stroke depressionJ.Chin J of Clinical Rational Drug Use, 2015, 8 (16) :122-123. 16文军, 李永涛, 李淼, 等.小剂量米氮平联合疏肝解郁胶囊在脑卒中后抑郁 症治疗中的应用J.临床合理用药杂志, 2015, 8 (13) :41-42.Wen J, Li YT, Li M, et al.The application of low-dose Mirtazapine Combined with Shugan Jieyu capsule in the treatment of post-stroke depressionJ.Chin J of Clinical Rational Drug Use, 2015, 8 (13) :41-42.
