1、1乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过乳酸脱氢酶反应系统中反应完成后还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用终点比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞和组织裂解萃取样品（动物、人体、植物、昆虫等）乳酸脱氢酶（LDH）的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景乳酸脱氢酶是一种氧化还原酶，催化丙酮酸和乳酸的互相转化反应。乳酸脱氢酶由4个亚单位构成，有两种类型：肌肉型和心肌型。根据
2、其亚单位成分，分为5种同功酶。乳酸脱氢酶的活性检测用来评价细胞或组织的损害状况。基于丙酮酸（pyruvate）底物在乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH ）的催化下，转化成乳酸（lactate ） ，同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD） ，完全反应后，在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长）由此定量测定乳酸脱氢酶的活性。乳酸脱氢酶反应系统为：lactate
3、 dehydrogenasepyruvate + NADH lactate + NAD+（高吸收峰） （低吸收峰）产品内容缓冲液（Reagent A） 5 毫升反应液（Reagent B） 500 微升底色液（Reagent C） 500 微升阴性液（Reagent D） 500 微升产品说明书 1 份保存方式保存 反应液（Reagent B）和 底色液（ Reagent C）在20冰箱里，其余的保存在 4冰箱里， 底色液（Reagent C ）避免光照，有效保证 12 月用户自备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析2实验步骤一、测定准备1 准备好待测样品（例如细胞裂
4、解样品等） ，置于冰槽里2 设定好分光光度仪（温度为 25）：波长 340nm，并置零 3 缓冲液（Reagent A）室温下均衡温度二、背景对照测定1 移取 195 微升 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2 加入 5 微升 阴性液（Reagent D）3 加入 25 微升 反应液（Reagent B）4 在 25温度下孵育 3 分钟5 加入 25 微升 底色液（Reagent C）6 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）7 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照 0 分钟读数8 在 25温度下孵育 5 分钟9 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照 5 分钟读数10背景空对照实际
5、读数：0 分钟读数5 分钟读数 三、 样品测定1 移取 195 微升 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2 加入 5 微升待测样品（20 微克蛋白） （注意： 样品须清澈，且 pH 为 7.5）3 加入 25 微升 反应液（Reagent B）4 在 25温度下孵育 3 分钟5 加入 25 微升 底色液（Reagent C）6 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）7 即刻放进分光光度仪检测，此为样品 0 分钟读数8 在 25温度下孵育 5 分钟9 即刻放进分光光度仪检测，此为样品 5 分钟读数10 样品实际读数：0 分钟读数5 分钟读数四、计算样品活性（样品读数背景读数）X 样品稀释
6、倍数 X 1（体系容量；毫升）0.005（样品容量；毫升）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 5（反应时间；分钟）单位/毫升 （样品蛋白浓度）毫克/毫升单位/毫克单位微摩尔丙酮酸/分钟五、 酶标板测定1 在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品32 分别移取 195 微升 缓冲液（Reagent A）到相应孔中3 分别加入 5 微升 阴性液（ Reagent D）或待测样品（20 微克蛋白） （注意： 样品须清澈，且 pH 为7.5）4 分别加入 25 微升 反应液（Reagent B）5 在 25温度下孵育 3 分钟6 分别加入 25 微升 底色液（Reagent C）7 轻轻摇动酶标
7、板8 即刻放进酶标仪检测，此为 0 分钟读数9 在 25温度下孵育 5 分钟10 即刻放进酶标仪检测，此为 5 分钟读数11 实际读数：0 分钟读数5 分钟读数12 活性计算（样品读数背景读数）X 样品稀释倍数 X 0.25（体系容量；毫升）0.005（样品容量；毫升）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 0.6（厘米）X 5（反应时间；分钟）单位/毫升（样品蛋白浓度）毫克/毫升单位/毫克单位微摩尔丙酮酸/分钟注意事项1 本产品为 20 次操作，包括背景对照2 操作时，须戴手套3 系统操作过程中，背景测定只需 1 次4 样品须澄清，至关重要 5 比色测定后，比色皿须清洗彻底6 背景空对照 0 分钟
8、读数通常 0.2 至 0.8 为理想状态7 背景空对照的正常读数差值（0 分钟5 分钟）通常为 0.001 至 0.005（正负即可）8 样品 0 分钟读数通常和背景空对照 0 分钟读数一致9 样本测定 5 分钟读数低于 0 分钟读数表明具有酶活性10建议待测样本蛋白浓度为 20 微克/5 微升；如果样本酶活性过低或过高， 则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 GMS30030.1） 11如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度12乳酸脱氢酶单位活性定义为：在 25，pH 7.5 条件下，每分钟内能够转化 1 微摩尔丙酮酸至乳酸所需的酶量作为一个活性单位13本公司提供系列乳酸脱氢酶检测试剂产品质量标准1 本产品经鉴定性能稳定2 本产品经鉴定检测敏感4
