1、实验八 微生物的生理生化反应、免疫标本的观察实验目的：掌握细菌生理生化反应原理和方法了解体外免疫反应的原理及意义。实验材料：培养基：生理生化培养基菌种：大肠杆菌、产气杆菌实验原理：微生物的生理生化反应原理：各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。不同的细菌在糖的分解能力上存在很大的差异。有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸不产生气体。例如大肠杆菌分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，
2、普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来判断。在培养基中加入溴麝香草酚蓝(p小于 6.0 时呈黄色，p在 6.0-7.6 时为绿色，p大于 7.6 时呈蓝色)，当发酵产酸时，使培养基由绿色变为黄色。气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出现来验证IMVIC 是吲哚试验（idol test）、甲基红实验（ methyl red test）、伏普试验(VogesProkauer test, V.P.试验)和柠檬酸盐试验(citrate test)的缩写。四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气杆菌(Eenterobacter aerogenes)，而且主要用于
3、水的细菌学检查，因为大肠杆菌虽非致病菌，但饮水中若大肠杆菌超过一定数量则表示受到粪便污染，而产气杆菌则广泛存在于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。吲哚实验:有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫瑰吲哚。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气杆菌阴性。甲基红试验。某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中糖先分解成丙酮酸，丙酮酸再分解成甲酸、乙酸、乳酸等，因而使培养基变酸，用甲基红指示剂pH4.2（红色）6.3（黄色），可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。大肠杆菌为阳性反应，产气杆菌为阴性反应。伏普试验。某些细菌可利用葡萄糖产生丙
4、酮酸，丙酮酸进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，此物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即伏普反应阳性，没有红色化合物产生则为阴性。产气杆菌伏普反应阳性，大肠杆菌伏普反应阴性。柠檬酸盐试验。有些细菌能利用柠檬酸钠作为碳源，例如产气杆菌；而另一些细菌不能利用柠檬酸钠，例如大肠杆菌。细菌在分解柠檬酸盐后，产生碱性化合物，使培养基 pH 升高，在有溴麝香草酚蓝指示剂的情况下，培养基由绿色变为深蓝色。溴麝香草酚蓝的指示范围为：p小于 6.0 时呈黄色，p在 6.0-7.6 时为绿色，p大于 7.6 时呈蓝色。E 花环实验：是检测人类外周斜数量的一种
5、体外实验方法。其原理是利用人类 T 淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体，可特异性吸附绵羊红细胞。淋巴细胞转化实验是检测人外周血 T 淋巴细胞功能的体外实验。其原理是利用人外周血 T 淋巴细胞表面的有丝分裂原受体与相应丝裂原在体外结合后，可使细胞转化为淋巴母细胞，表现为体积增大、胞浆丰富、并能进行有丝分裂实验内容：1.微生物的生理生化反应（1） 配置生理生化反应培养基：单糖发酵培养基、吲哚实验培养基、甲基红实验培养基、V-P 实验培养基、柠檬酸盐实验培养基（2） 接种：分别接种大肠杆菌与产气杆菌（3） 培养：37 度静止培养2.免疫标本的观察（1） E 花环实验（2） 淋巴细胞转化实验示教内容：细菌接种
