1、实验性肝性脑病,实验目的,掌握肝性脑病的概念、发病机制和临床表现。 掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的方法。 熟悉氨在肝性脑病发病机制中的作用。,病因与分类发病机制诱发因素,实验原理,肝 性 脑 病,概 念,是继发于严重肝脏疾病的神经精神综合征。是由于急性或慢性肝功能不全，使大量毒性代谢产物在血循环中堆积，临床上出现一系列神经精神症状，最终出现肝性昏迷。,严重肝脏疾患,肝脏不能处理 毒性代谢产物,门-体分流,毒性产物 绕过肝脏,病因与分类,一、病因严重肝功能障碍 1. 晚期肝硬化2. 急性重型病毒性肝炎3. 晚期肝癌4. 严重急性肝中毒5. 门-体静脉分流术后,二、分类内源性肝性脑病、外源性肝性
2、脑病,由急性严重肝细胞坏死 引起，毒性物质在通过肝脏时未经解毒即进入体循环。,多由慢性肝脏疾患引起，毒性物质通过分流绕过肝脏，未经解毒即进入体循环。,第一期：轻微的性格及行为异常记忆力下降，学习、定向障碍,(前驱期),三、分期与临床表现,肝性脑病第三期,第三期：昏睡期，精神错乱、易怒、暴躁,(昏睡期),肝性脑病第四期,第四期：昏迷期，神志丧失、不能唤醒,(昏迷期),发 病 机 制,、氨中毒学说、假性神经递质学说、血浆氨基酸失衡学说、GABA学说,一、氨中毒学说,NH3 脑代谢、功能障碍,（一）血氨升高1、血氨清除不足,75%的氨来源于肠道,蛋白质,尿素,2、血氨产生过多,（1） 肠道产氨增多,
3、上消化道出血,血液蛋白质分解,氨产生增加,肠粘膜淤血、水肿,肝肾综合征,弥散入 肠道的尿素,（2）肾脏产氨增多,pH对肾泌氨及肠道吸收氨的影响,（3）肌肉产氨增多,肌肉收缩加剧,上消化道出血,高蛋白饮食,血氨升高,肠道细菌产氨增加,肝硬化,肠粘膜淤血、水肿,肌肉分解代谢增强,肾脏产氨,氨对脑组织的毒性作用 示意图-能量代谢,3. 对神经细胞膜有抑制作用,干扰Na+-K+-ATPase活性,NH3,K+内流减少，影响Na+-K+的正常膜分布,神经冲动的形成、传导受抑制,二、假性神经递质学说,与正常(真性)神经递质结构相似，但其功能却远较正常神经递质为 弱的一类物质(递质),正常及假性神经递质,苯
4、丙氨酸,酪氨酸,假性神经递质的致病作用脑干网状结构是维持意识的基础。,外周感受器的 神经冲动,脑干网状结构,上行激动系统,维持大脑 皮层兴奋,假性神经递质增多,竞争性取代正常神经递质,网状结构上行激动系统功能障碍,昏睡、昏迷,1. 血浆氨基酸分类支链氨基酸(branch chain amino acid, BCAA)：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸芳香族氨基酸（aromatic amino acid, AAA)：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸,三、氨基酸失衡学说,氨基酸平衡图,3.03.5,0.61.2,2. 血浆氨基酸失衡及机制AAA (胰高血糖素) BCAA (胰岛素),胰高血糖素,肌肉、肝脏分解代谢
5、,骨骼肌内摄取利用增加,3. 血浆氨基酸失衡与肝性脑病AAA: 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸BCAA: 亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸由同一载体转运而通过血脑屏障假性神经递质,苯乙胺,苯乙醇胺,脱羧酶,-羟化酶,酪胺,羟苯乙醇胺,脱羧酶,-羟化酶,5-羟色氨酸,5-羟色胺,羟化酶,脱羧酶,多巴,多巴胺,去甲肾上腺素,苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸,羟化酶,羟化酶,脱羧酶,-羟化酶,血浆氨基酸失衡学说： 假性神经递质学说的补充和发展。,四、-氨基丁酸学说1. GABA来源：,谷氨酸 GABA,肠道,细菌脱羧酶,突触间隙GABA神经类固醇类物质GABA受体-配体结合2. 毒性作用：,抑制性神经递质,血 NH3,G
6、ABA site,Benzodiazepines site,Benzodiazepines site,GABA site,Benzodiazepines site,Benzodiazepines site,GABA,GABA与突触后神经元的特异性GABA受体结合氯离子通道开放氯离子进入胞内神经细胞静息电位处于超极化状态突触后抑制肝性脑病,血氨,胰高血糖素 胰岛素,谷氨酰胺,脑内GABA,神经类固醇,受体-配体结合,促进中性AA入脑,氨基酸失衡,假性神经递质 正常神经递质,GABA作用,+谷氨酸,诱 发 因 素,消化道出血：食管下端和胃底部静脉 曲张,曲张的食管 下端静脉破裂,血液中蛋白分解,氨
7、产生增加,2. 电解质和酸碱平衡紊乱,NH3,NH4+,H+,OH-,肾小管上皮细胞,血液,管腔,NH3,H+,NH4+,酸中毒时,肾小管上皮细胞,血液,管腔,碱中毒时,OH-,NH3,促进氨的生成与吸收,3. 感染：细菌及其毒素加重肝实质损伤,感染,4. 肾功能障碍：氮质血症,肝性脑病,5. 高蛋白饮食,蛋白,氨及有毒物质,肠道细菌,实验原理,采用大部分肝叶结扎法，造成肝功能严重损害，然后经十二指肠输入氯化铵溶液，使动物体内血氨迅速升高，以致出现震颤、抽搐、昏迷等肝性脑病的症状。,动物：家兔。 器材：常规动物手术器械、兔台、5ml和20ml注射器、细导尿管、粗棉线、纱布。 药品：1%普鲁卡因
8、、5%氯化铵溶液。,实验用品,1、称重、固定、腹部正中备皮。,实验步骤,2、1%普鲁卡因（78ml）作上腹壁正中局麻，自剑突下沿腹白线，作上腹正中纵切口约78cm，打开腹腔。,3、暴露肝脏，切断镰状韧带和肝胃韧带，完全游离肝叶。,注意事项： 游离肝脏要轻柔，剪镰状韧带时勿损伤膈肌!,4、结扎肝叶：保留右外叶及尾叶。,注意事项： 结扎肝叶应靠近根部肝门处，避免损伤肝叶造成出血！,5、十二指肠插管。,注意事项： 朝向十二指肠方向，插入肠腔约4-5cm，必须固定牢固，以防插管滑脱掉入腹腔 。,6、将细导尿管另一端置于腹腔之外，用止血钳夹住腹壁，关闭腹腔。每隔5min向插管内注入5氯化铵溶液5ml，直至动物出现抽搐。,注意事项： 术后须关闭腹腔，避免腹压升高导致内脏外溢！,实验分组 结扎+生理盐水：1组 不结扎+NH4Cl液：2、3组 结扎+NH4Cl液：4、5、6、7组,实验结果记录,思考题,为什么从十二肠道注入氯化铵溶液可使家兔的血氨升高？,血氨升高引起肝性脑病的机制是什么？,各实验组出现不同结果说明了什么问题？,
