1、 的 全 长 为 包 含 鹊 绲 阄 。 和 均 为 亲 水 蛋 白 ， 存在多 个磷酸， ， 瑃 琲 甌 甌 琧 ， ， 狫 基因 全 长 狫 基因 系统 进 化树 的 构建和 同 源 比 对 基因 扩增 结果 基因 全 长 一 基因 系统 进 化树 的 构建和 同 源 比 对 蛋 白 的 理 化性 质 基因 扩增 结果 第 一 章前言 舯 庑 味 飂 谐 娓 认 为 表皮 下 面广 泛存在着神 经 丛【 ， 并 构成 一 个分散 的 网 络 【 】 ； 包 括 梭 状 的 神 经 节 和 感层 的 神 经 丛联 系起来 ， 而肌肉 下 的 神 经 丛也 形 成 一 个 非 常 有规 律 的
2、 纤维 网 ， 可 以 观察到 少 量 的 神 经 细 胞 【 】 ， 且 大 多 数 神 经 元 细 胞 是 双 极 的 ， 尽 管 也 存在单 极 的 和 多 极 的 【 。诔 业闹 芪 誓 冢 猿墒斓呢 和 韬 吐 殉仓 芪 卜 执嬖 谏 窬 浴 】 。 总之 ， 淡 水 涡 虫 的 神 经 系统 看起来 非 常 简单 ， 但 是 却非 常 复 杂 ， 主要 表现 在： 在细 胞 水 平上 ， 存在神 经 元 的 多 元 化； 在结构上 ， 存在分 泌 泡 的 多 元 化； 在基因 水 平上 ， 存在多 种图 涡 虫 中 枢 神 经 系统 再 生 模式图谝 唤锥危 涸偕 蟮 鞍子 暧 蒘
3、 等 在金 鱼 中 首 次发 现 ， 当 金 鱼 视 网 膜 神 经 受 损后 ，。 随后 ，过序列 测 定 和 分析 以 后 发 现 幕蛐 蛄 泻 蚮 一 嗤 瑀 的 基因 序列和 狫 的 相同 。 据 此 认 为 这 两 种 蛋 白 质的 来 源 为 同 一 家 族 并 将其命名为 。是 一 类不溶 于 去污剂 的 蛋 白 质， 并 且 在蔗 糖 密 度 梯度 离 心实 验中 ， 它 是 浮于 上层 的 蛋 白 质。 因 此 经 常 被 用 来 作 为 脂 筏 的 标 记 蛋 白 。 在氨基端含 有高 水 平的 共定 位 关系且 其功 能 相 互依存， 当 一 个 齭 减 少 其表达 或
4、者不的 结构和 功 能和 是 两 个 高 度 保 守 的 脂 筏 相关蛋 白 ， 其中 狫 的 基因 序列比 较 保 守 ， 通过序列 比 对 发 现 鼠 的 狫 氨基酸序列 与 果 蝇的 氨基酸序列 竟 然 达 到 的 相 似 性 。 蛋 白 由 于 其结构特 征 ， 被 认 为 是 家 族 蛋 白 ， 含 有 的 结构和 功 能在 与 其他 蛋 白 质之 间 的 相互作 用 ， 例如 它 与 之 间 的 相互作 用 ， 或 者它 们 二者结合与 其他 蛋 白 质之 间 的 相互作 用 。 综 上 所述 ， 不难 看出 的 功 能 非常 广 泛， 与 谎 肷 窬 5 姆 只 泄兀 谕 套饔
5、茫 頣 细 胞 等 。 但是 还 被 报 道 参 与 了肿瘤的 发 生 作 用 ， 而作 为 同 家 族 的 却未 见 报 道 ，暗 示 着这 两 种 蛋 白 质在功 能 上 存在着共性 和 特 性 。在动 物 进 化过程中 ， 自 扁 形 动 物 开 始 首 次出 现 了两 侧对 称 的 体 制 和 中 胚 层 ， 从 而引起一 系列 组 织、 器官 和 系统 的 分 化， 使动 物 达 到 了器官 系统 水 平， 为 动 物 由 水 生 进 化到 陆 生 奠定 了基础 。 因 此 作 为 扁 形 动 物 门 代表动 物 的 日本三角 涡 虫 在动 物 进 化史中 占 有重 要 地位 ， 对
6、 研 究 动 物 起源 与 进 化具有 重 要 意 义。 日本三角 涡 虫 另外 一 个 特 点 是 具有 极强 的 再 生 能 力 ， 据 ， 康 缺 溃 旱 蔽 谐 姹 磺谐 段 后 ， 每 段 均 可 恢复 成 一 个 新个 体 。 同 时日本三角 涡 虫 出 现 了原 始 的 中 枢 神 经 系统 ， 自 耳 突 后 切 割 去头 后 ，其后 段 在一 周 内 能 完全 再 生 包 括 脑神 经 在内 完整 的 头 【 】 。 另外 ， 当 涡 虫 连续 饥饿时， 内部 的 器官 逐 渐 被 消耗， 但 神 经 系统 不受 影 响 ， 因 此 研 究 日本三角 涡 虫 神 经 系统 的
7、 再 生 有重 要 意 义。村 附 近 泉溪 日本三角 涡 虫 在我 国 分布 广 泛， 在鱼 泉村 附 近 的 沟 渠 里， 翻开 石 头 ， 发 现 涡虫 后 ， 用 毛 笔 逆向 轻轻的 将涡 虫 刷 入采 集瓶 中 。 带回实 验室 后 ， 为 了防 止 环 境 的 突 然 变化对 涡 虫 产生 的 影 响 ， 先用 采集地的 水 对 涡 虫 进 行 培 养 ， 待 其适 应 一 两 天 后 ， 再 换实 验室 内 曝过氯气的 自 来 水 进 行 培 养 ， 室 内 培 养 于 恒温 培 养 箱中 。 每 天 换水 一 次， 每周 喂食新鲜鱼 脾脏 一 次。 实 验前涡 虫 至 少 饥
8、饿一 周 。图 日本三角 涡 虫 采 集地环 境实 验过程中 所用 的 实 验仪 器如 下 表所示 。低 温 高 速离 心机高 速常 温 离 心机 上 海 精 宏 实 验设 备 有 限 公 司上 海 精 宏 实 验设 备 有 限 公 司苏 州净化设 备 有 限 公 司北 京 六一 仪 器厂江苏 金 坛市中 大 仪 器厂上 海 申 安 医 疗 器械 厂立式自 动 电 热 压 力 蒸汽 灭 菌 器电 热 鼓 风 干 燥箱北 京 中 兴 伟业仪 器有 限 公 司 哈 尔 滨 市东 联 电 子技 术开 发 有 限 公 司北 京 金 紫光 科技 发 展 有 限 公 司双 显 恒温 加 热 磁 力 搅拌器
9、 购 自 康 为 世 纪 等 国 产分 析 纯大 肠 杆 菌 母液氨苄 青霉素 溶 液 液 体 培 养 基的 氨苄 青霉素 粉末 溶 解 保 存 固 体 培 养 基 水 液 体 培 养 基， 琼 脂日本三角 涡 虫 基因 的 克 隆 及 功 能 分析特 异性 引物 ： 瓹 瓽 瓽 内 参 引物 ： 瓵 谝 惶 炫渲艱 谕 绯髦 杏 盟羲 水 ， 黑 色 袋 子密 封， 在磁 力 搅拌器上 搅拌 崛 试 剂 ， 尽 量 全 部 覆 盖 住虫 体 ， 樘嶙 R粕 喜 剿 萌芤旱 纳 锨 逯 列 碌睦 胄墓苤校 尤 氯仿， 用 力 振荡 ， 室异丙 醇 稍 锲 锨 澹 诔 还 魈 惺 椅 赂稍 浓
10、度 测 定用 超 微 量 分 光 光 度 计测 定 呐 群 蚈 ， 测 定 之 前首 先日本三角 涡 虫 基因 的 克 隆 及 功 能 分析 鲜龌 旌 衔 锼 怖 牖 煸 群 螅 赑 仪 中 进 行 如 下 反 应 ， ， 组 分疘 将上 述 反 应 液 瞬 离 混 匀 ， 在 墙 娣从 反转录 反应 喜 僮 ： 运 嶙 躌 为 模板， 根 据 试 剂 盒 里面的 说 明 进 行 如 下 反 应 ：日本三角 涡 虫 基因 的 克 隆 及 功 能 分析 ， 胶 加 入异丙 醇 ， 进 行 充 分混 匀 后 在冰上 放 置 在冷 冻 离 心机 中 妫 转离 心 进 行 漂 洗 ， 在冷 冻 离 心
11、机 中 离 心 罵 混 匀 后 反 应 如 下 ： 在 侵蟹从 妫 ， 室 温 条 件下 胄 向 中 加 入氯仿 的 异丙 醇 后 混 匀 ， 然 后 在冰上 反 应 笃 锨 澹 缓 笫 椅 赂稍 配 制 如 下 反 转录 反 应 液 ：组 分 从 崾 蠹 吹 玫 。和 基因 的 克 隆基因 的 保 守序列 。 蚪 嚎 橹屑 尤 笤 。 尤 胍 掖 ， 胄 纯 傻玫 紻 溶 液 ， 冰箱中 一 保 存。组 分 用 接 种 针 挑取大 肠 杆 菌 妫 视 捅 婢 在平板培 养 基上 分级 划 线 。的 三角 锥形 瓶中 ， 塞 上 棉 塞 后 高 温 高 压灭菌 然 后 冷 却至 室 温 。锏 絆 时， 将其放 置 在冰上 停连接 液 混 匀 后 冰浴 吸 取 上 清 ， 余 下 的 涂 板 影 避 ， 之 后 倒置 过夜 培 养 。 在每 个 平板上 挑选 四个 单 菌 落 ， 放 入四个 加 液 体 培 养 基中 影 避 ， 振荡锨 澹 匦 录 尤 无 的 加 氨苄 的 液 体 培 养 基中 ， 培 养 ， 封口 后 送
