1、海南省汉、黎族人群缺失型关键词：地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省 摘要:目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失（-SEA）、右侧缺失（-3.7）和左侧缺失（-4.2）三种-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失（-SEA）、右侧缺失（-3.7）和左侧缺失（-4.2）三种-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例-地中海贫血携带者，携带率为.69%;三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635，其中-SEA、-3.7和-4.2的基因频率分别为0.07、0.030
2、5、0.0203，共发现-SEA/、-3.7/和-4.2/三种基因型，其中-SEA/5例，-3.7/例，-4.2/8例。在201例海南黎族人中检出114例-地中海贫血携带者，携带率为56.72%，三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607，其中-SEA、-3.7和-4.2的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891，共发现-SEA/、-3.7/、-3.7/-3.7、-3.7/-4.2、-4.2/、和-4.2/-4.2六种基因型，其中-SEA/3例，-3.7/39例，-3.7/-3.76例，-3.7/-4.218例，-4.2/38例，-4.2/-4.210例。结论海南省汉、黎族
3、人群是-地中海贫血的高发群体。 关键词:地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省 Investigationintothedeletiontypesof-thalassemiainHanandLINationalitiesinHainanProvince. Abstract:ObjectiveToinvestigatetheincidences、theallelicfrequenciesandthegenotypesfrequenciesofthree-tha-lassemiadeletiontypes（-SEA、-3.7、-4.2）andtheirdistributionsinH
4、anandLinationalitiesinHainanProvince.MethodsThree-thalassemiadeletiontypes，i.eSoutheastAsiadeletion（-SEA），rightdeletion（-3.7）andleftdeletion（-4.2），erasechainreaction（PCR）inHanandLinationalitiesinHainan.Results25carriers201individualsinLinationality，andtheincidenceofcarriers收集与整理，。07inLinationality.S
5、ixgenotypesiainHanandLinationalitiesinHainanprovince. Keyia;Polymerasechainreaction（PCR）;Minoritynationality;HainanProvince -地中海贫血（-地贫）是一种严重危害人类健康的遗传病，其主要特征是-珠蛋白链合成减少（+地贫）或缺如（0地贫）。-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类1，-珠蛋白基因缺失是导致-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种-珠蛋白基因缺失突变，在中国人中已发现7种，其中东南亚型缺失突变（-SEA）、右侧缺失型突变（-3.7）和左侧缺失型突变（
6、-4.2）三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型24。为了研究海南省汉、黎族人群中-地中海贫血的发病率及其基因型的分布特点，我们应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型-地贫突变类型，现将结果报告如下。 1材料与方法 1.1DNA样品用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血，按Lahiri等方法5提取DNA，阳性对照标本由南方医科大学医学遗传学教研室徐湘民教授惠赠。 1.2PCR扩增东南亚型缺失突
7、变分析按文献6进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照AmoldS.-C.Tan7等报道合成引物。扩增-SEA、-3.7和-4.2的多重PCR体系均采用TaKaRaLATaqTMJ及缓冲液（宝生物工程有限公司产品），PCR反应体积为25l，在PCR缓冲液（1GCBuffer，2.5mmol/LMgCl2）中含模板DNA0.2g，引物0.20.5mol/L，dNTP为200mol/L，1UTaqDNA聚合酶，循环参数为99变性5min，85加酶，56退火1min，72延伸2min，然后951min，561min，722min，30个循环后72延伸7min。扩增产物在1%琼脂糖凝胶中电泳，经E
8、B染色在紫外光灯下观察结果并照相。 2结果 2.1-SEA、-3.7和-4.2缺失型突变的多重PCR扩增在PCR反应体系中同时扩增了2基因的一个1800bp的片段，用以判断样品DNA的2基因是否缺失，从而判断-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无-SEA、-3.7和-4.2缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子（-SEA/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子（-3.7/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现
9、一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子（-3.7/-3.7）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子（-4.2/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子（-4.2/-4.2）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子（-3.7/-4.2）的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。 图1-SEA、-3.7和-4.2缺失型突变的多重PCR检测结果（略） Fig1TheP
10、CR-amplifiedresultof-SEA、-3.7、-4.2deletion 注:M为GeneRulerTMDNALadder（华美产品），泳道1-7对应的样本基因型分别为a34 a/aa，-SEA/，-3.7/，-3.7/-3.7，-4.2/，-4.2/-4.2，-3.7/-4.2。 M:Themarker（GeneRulerTMDNALadder）.Thegenotyesofsamplescorrespondingtofromlane1tolane7ia deletion mutation（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）in Han and Li nationaliti
11、es of Hainan provinc 表2 海南省汉、黎族人三种缺失型-地中海贫血突变的基因型结果（略）Tab2 The genotypes of three-thalassemia deletion（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）in Han and Li nationalities of Hainan Province 3 讨论 -地中海贫血是一种遗传性溶血性血液疾病，也是世界上最常见的单基因遗传病之一，其主要特征是-珠蛋白链合成减少（ + 地贫）或缺如（ 0 地贫）。我国南方各省是该病的高发地区。因此，研究我国南方各省分的-地中海贫血的基因类型和频率分布，对开展遗传咨询和
12、确定有效的普查法、产前诊断策略具有重要意义。 以聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中三种我国最常见缺失型-地中海贫血基因型，发现东南亚型缺失（- SEA ）、右侧缺失（- 3.7 ）和左侧缺失（- 4.2 ）在197例海南汉族人中检出25例-地中海贫血携带者，携带率为.69%，而在201例海南黎族人中检出114例-地中海贫血携带者，携带率为56.72%，三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607，其中左侧缺失（- 4.2 ）和右侧缺失（- 3.7 ）的基因频率分别高达0.1891和0.1716，明显高于汉族人群;在基因型分析中共检出六种基因型，以右侧缺失型杂合子（- 3
13、.7 /）、左侧缺失型杂合子（- 4.2 /）、右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子（- 3.7 /- 4.2 ）为主，但某些基因型的构成比与汉族人群不同，- SEA /基因型的比例较低，仅占2.63%，明显低于汉族人群。海南汉、黎族人群中三种我国最常见缺失型-地中海贫血基因型已达到了Hardy-Weinbery遗传平衡，说明以上三种缺失型-地中海贫血的基因突变类型在海南汉、黎族人群中是较早发生的事件。本次研究结果表明，海南省汉、黎族人群是-地中海贫血的高发群体，且以右侧缺失（- 3.7 ）和左侧缺失（- 4.2 ）为主，另外海南汉族人群中-地中海贫血突变的携带率（.69%）与广西（14.95%）
14、和广东（8.3%）地区接近，但远高于全国平均水平（2.64%）以及香港（4.5%）、台湾（4%）、江西（2.60%）、四川（1.92%）、浙江（1.20%）、新疆（0.47%）、上海（0.25%）的-地中海贫血突变携带率 811 ;而海南黎族人群中-地中海贫血突变的携带率（56.94%）更是高居全国之首。海南黎族人群居住地为疟疾高发区，其人群中-地中海贫血突变的携带率如此之高，可能与疟疾的优势选择作用有关。 过去曾用醋酸纤维素薄膜电泳法筛查海南省汉族人新生儿中的-地中海贫血携带者，再应用聚合酶链反应（PCR）技术筛查-地中海贫血Hb Barts携带者中的东南亚缺失型突变，当时筛查结果表明，在海
15、南省汉族人中-地中海贫血突变的携带率为4.51%，其中东南亚缺失型突变的携带率为2.41%，占海南省汉族人群中-地中海贫血总数的53.49% 6 。以上筛查结果与本次研究结果比较，除了东南亚缺失型突变的携带率基本一致（2.41%与2.54%）外，-地中海贫血突变的携带率结果（4.51%与.69%）相差较大，其原因可能是用微量醋酸纤维素簿膜电泳法检测患者血样，以出现异常快速区带（Hb Barts区带）者确定为-地中海贫血突变34 携带者的初筛方法，导致了部分静止型-地中海贫血的漏检，造成对海南省汉族人中-地中海贫血突变携带率的检测结果严重偏低。静止型-地中海贫血几乎无临床症状，血液学指标基本正常，用传统血液学分析法筛查恐有较多遗漏。因此，应用聚合酶链反应（PCR）技术筛查-地中海贫血的三种常见突变是一种快速、准确的方法，可以减少静止型-地中海贫血的漏检。 本研究获得了海南省汉、黎族人群中-地中海贫血基因突变类型、基因频率和构成比的资料，为阐明海南省-地中海贫血分子缺陷提供科学依据，对于海南省地中海贫血的防治具有重要意义。
