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霍乱弧菌T6SS针状蛋白VgrG3及其免疫蛋白的结构和功能研究.doc

1、 作者 签名 :彳 锄三萝名 甌 猇 猻 纑 , 称 的 疏 水双 层 膜,内 外 膜间 有一 个 亲 水的 间 质 。 大多 数细 菌 需要 分泌 像蛋白 酶或者 酯 酶来 把较 大的 复合物 大分子水解 成它们 能够 吸 收 的 营 养物 质 ,或 者 分泌 一 些蛋白 酶来 帮助 它们 摄 取重要 的 金 属离 子像 铁 离子更 有效地侵染 宿 主,也释 放一 些 毒性因 子到 宿 主细 胞 里,来 降低宿 主细 胞 的 抵 抗能力或 者 把宿 主细 胞 的 信 号 转 化为 对 自 身 有利 的 方向 ;琫 和 接 合转 运途径 在细 菌 迁 移和 生物 膜形 成上 有很大作 用 。泌

2、 系统 的 识别 位点,由 T颂 逶 说街 苤 手 校缓 笸 桶 通 道 而 运出谋 ; 于 系统 的 功 能多 样性以及它和 的 效应蛋白 一 免 疫蛋白 对群 体 受 来 行使宿 主细 胞 的 重要 使命 。 效应蛋白 一 般 定 位于 细 胞 周质 空 间 中来 降解靶 细 胞 的 细 胞 壁 或 细 胞 膜,进 而 杀 死这 些 竞 争 者 。 这 些 效应蛋白 目 前 根 据 它们 的 是 降解 细 菌 细 胞 膜的 磷脂 酰 乙 琋籑 , 删 錱 痝 这 个最 近 电 镜研 究 表明的 两 个 蛋白 疶也形 成管 状 结构, 长 管 状 复合物 ,它和 噬菌 体 尾 鞘在形 状 及

3、位置 上 很相 似 。 管 被 认为 镶收 缩,注射 出芗 癡 胱 锤 春 衔 : 和 春 衔锏 腘 端 部分具 有极 高 的 相 似 性缤 。 道 ,的 私 峁 褂 蛴 牖袈 一 【 鶵舅 氐鞍 椎 募 鞍 捉涣 = 峁 褂 图 鉴 定 为 是 一 个 肽聚 糖水解 酶,它能水解 其 他 革 兰氏 阴性菌 竞 争 者 的 细 胞 膜肽聚 糖引 嘶 涵帆 谩 拼 邸 海呲耐旧 、,臁 海唬篿 : 毗 弧 猒口 啊 瘛“ 鯻 瘛 卜 ,岵 囊 凰 葜 痩瘛鲆弧 !猟叩 悃猅缮 坤呷 啊 瘛瘛鰌 丁 馮 芍 荨虸础甠 甠 輕 帅 伽 峭 畁 窈 墩鰑 啪嗅 兜稹猶 占盈 瞅 ”踡卜 癐 海痟 畂

4、试 验手 段再 结合它们 的 三 维 结构阐 述 了 的 抑 制机 制以及的 酶活 活存 。 室所保 存 。基因 组 由 北 京 大学 生命 科 学 学 院 苏 晓东 实 验室所 提供 。 表、疘 公 司 ;蚖 购第 耉 复合物 及的 表达 、纯 化和 结晶超 声 细 胞 破 碎 仪 :武汉世纪 超 杰公 司,蛋白 胨 湍 柑 崛 觗至,高 压浞秩芙 猓 颖宜 琌 补 。 表 甘 氨 酸 郾 纺 旱缬 浓 缩胶 配 制表 , 视 溴 酚蓝 ,混 匀 溶 解 。表 培养基配 制表组 分组 分第 耉 复合物 及的 表达 、纯 化和 结晶表 蛋白 的 参数统 计第 耉 复合物 及的 表达 、纯 化和

5、 结晶 和 克隆 所 用 的 引 物引 物 序列 引 物 名 称目的 产物 酶切 体 系纯 化回收 酶切 产物 。各 组 分混 均 , 消 化过 夜 。回收 酶切 产物 。各 成分充 分混 匀 , 恒 温 水浴 锅 中静置 。 从 。 淙 龃 蟪 司 鶥 感受 态 细 胞 冰 上 静置 。甘 油保 菌 。第 耉 复合物 及的 表达 、纯 化和 结晶 平衡 好的 酸 、瞻 彼 帷 苯 丙氨 酸 各 琇 异亮 氨 酸 、缬 氨 酸 、亮 氨 酸 各 。 其 后续 步 骤同 咎 蛋白 的 纯 化策 略 。第 耉 复合物 及的 表达 、纯 化和 结晶实 验结果 腝幌 咝蕴 荻 认赐 严 吕 腝尹图 的 阴离子交换 阄 鐾 计 缀 柱 上 明显 出现 四个 峰 ,这 表明在溶 液可能有不 同的 再 尝试 离子柱 纯 化发 现 其 不 挂 柱 ,就 直 接 用

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