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钙离子通道蛋白CACNA1C与DLBCL免疫化疗疗效相关机制的研究.doc

1、 靴敝储熊略日期:砷咿师:刘艳艳摘钙通道蛋白与免疫化疗疗效的关系值得深入研究。材料与方法妥昔单抗敏感的细胞系,甃是对利妥昔单抗耐药的细胞系。例。从石蜡组织中提取胵椒 觳饣颊呋駽诙岳孜舻姑舾械南赴闛校珻基因的表达量明显高孜舻勾砹街窒赴,甃细胞较之甃细胞有较高结论 畆 琿 一甀 謞骻, 琣 嗽 , 瓹 篸 ,瑀琧目目 日唷致谢痵舌师:刘艳艳法对患者的、猯、三种抗体进行检测,将饕7治狦瓸蚽茜泶锬芄辉饫孜舻姑庖呋频牧菩緇,但有必要深入探讨利妥昔作用的发挥与机体宿主因素有关,包括效应细胞的数量和受体的类型。这些途径的异常可能导致原发耐药。早期研究显示钙离子传导通路在利妥昔单抗相关的细胞凋亡中起重要作用,

2、因为在被利妥昔单抗杀死的细胞中发现细胞内钙的增高。因此,在原发耐药的患者中,可能存在一些因素影响了利妥昔单抗介导的钙信号。利妥昔单抗通过信号引起淋巴瘤细胞凋亡与淋巴瘤细胞本吾材料与方法细胞株实验所用的主要试剂细胞培养基:材料与方法公司细胞凋亡试剂盒啪逆转录试剂盒北京化学试剂公司北京化学试剂公司北京化学试剂公司北京化学试剂公司北京索来宝公司荧光染料材料与方法铀羧胱铀芙庵:含的液。甃,。加双蒸水至,充分搅拌溶解,室温保存备用。微波炉大火煮至胶完全溶解,加溴化已淀至终浓在无菌操作台内用滤器消毒,使用实验所用的主要仪器和设备流式分选仪公司广东省汕头市医疗设备厂美国莱伯特公司材料与方法低温冰箱低温冰箱上

3、海艾测电子科技有限公司实验所用的主要耗材一次性滤器:公司血细胞计数板、盖玻片:上海市精密仪器仪表有限公司,一次性离心管:公司从石蜡组织中提取总:酒精;尤 浞只煸龋迫的柱,胄,尤痬全速离心:质量及浓度。反转录为材料与方法滴轮终止反应,产物存放于冰箱备用 山组织切片准备员盖衅谩庖咦橹衅曜迹呵衅暮穸。淠冢 耆蛊胶螅 翁贤暾片放于防脱片上,然后对应蜡实验分组及设计免疫组化染色方法将切好的玻片放入。俚突鸺尤仍馗床街。材料与方法对照的设计中的阳性细胞个数及染色强度,取其平均值。结果有异议时再次判断。采集图像及测定灰度值析图像。选取高倍镜下倍个具代表意义的阳性区域,测定其平均灰、饱和湿度的培养箱内进行常规传

4、代培养。材料与方法值为细胞抑制达时的药物浓度。从甃细胞系和甃细胞系中提取总:材料与方法重复上述步骤,后空甩,室温离心测龋山在琼脂糖凝胶上电泳测定完整性,各组细胞总蛋白质的提取用裂解液使细胞重悬, 琹弃去沉淀,收集上清,转入新的离心管备用。纯水 纯水丙烯酰胺溶液过硫酸铵过硫酸铵材料与方法整个装置放于洌缱猯小时;用蒸馏水漂洗转印膜,洗去膜上的染料和转膜液,将膜和适量封闭开塑料袋,弃去封闭液,加入稀释好的一抗,封闭塑料袋,摇床中室温摇动用二抗稀释液芤适当稀释二抗,放入膜,室夥从褐校岛兄衅毓庠赬线胶片上,逐步完成显影、定影、冲洗胶片,记录成像。用扫描仪记录结果,保存分析。实验分组:甃细胞组和甃细胞组胞仪通过比率法检测,这样可以测得双波长的荧光信号。有报道称据需要最终每个流式管约鱿赴。親合聪赴酱危离子内流情况。 狭魇交斯馄和分钟的基线,后随即流式细胞仪检测细胞凋亡率椎縞敦善墨蔷图耐药和敏感患者石蜡组织中基冈表达:耐药组好舾凶

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