1、实验技术与方法遗传HEREDCAS (Beijing) 6 (3)“ 41-42 1984观察小鼠活体骨髓细胞SCE的新技术王仁礼包淳洋张忠怨（上海市计划生育科学研究所）姊妹染色单体互换（SCE)离体测试系统由于易受方法上误差的影响，且不能测出经动物体内代谢活化系统激活后才能转化为活性致突变因子，因而离体试验的结果不能完全代表被测试物的活性诱变效应。为了解决活体SCE测试中BrdUrd在动物体内迅速降解的问题，目前一般应用BrdUrd多次注射法或药片埋植法2.31，但手续繁琐且用药量大。Kanda等人(1979）和Pedro (1980）先后采用吸附BrdUrd的活性炭注射法观察小鼠活体精原细
2、胞和骨髓细胞的SCE，使活体SCE技术大为简化4,81。我们在此基础上用IdUrd代替BrdUrd将Pedro的二次BrdUrd一活性炭注射观察活体骨髓细胞SCE的方法进一步简化为一次注射，建立了更为简便的活体SCE检测技术，以适合大规模测试需要。材料和方法（一）制备高度吸附IdUrd的活性炭悬浮液将研磨细的分析纯活性炭用1 N NaOH和1N HCl分别冲洗数次后，用蒸馏水冲洗到中性，收集活性炭置105干燥2小时，待用。在浓度为20 mg/ml的IdUrd溶液中加人干燥后的活性炭，使浓度成IdUrd 20 mg活性炭100mg/ml。使用前磁力搅拌2小时成均匀的悬浮液。将上述悬浮液离心，吸取
3、上清液0.2 ml加人已培养24小时的人外周血淋巴细胞中，继续培养两个细胞周期，收获细胞作姊妹染色单体分化染色，未发现SCD。由于人外周血淋巴细胞SCE离体试验中，达到姊妹染色单体分化染色的IdUrd浓度为10 Jzg/ml甚至更低。ml培液IdUrd 5 0 ug) s，因而IdUrd 20mg活性炭100mg/ml的悬浮液中游离IdUrd必定低于2501Ag/ml (50 Ftg/0.2 ml，即，ml培液中IdUrd总量低于5 0 ,ug)。表明上述浓度的悬浮液中至少有98.75外的IdUrd已牢固地吸附于活性炭上。（二）动物分组处理及制片ICR雌性小鼠，6-S周龄，体重20-23g,随
4、机分为10, 15, 20, 30, 40 mg 5个IdUrd剂量组及阳性对照组（IdUrd剂量为20 mg),腹内注射BrdUrd-活性炭悬浮液。24时后，各组动物均于腹内注射秋水仙素100 ,mg (4mg/kg体重), 2小时后杀鼠制片。其中阳性对照组在第9小时时腹内注射环磷酞酸(35,zg克体重）。取下小鼠股骨，用生理盐水冲击骨髓细胞，离心收集细胞悬浮于0.075 M KCl中，37低渗10分钟，用甲醇：冰醋酸（3:1)固定2次，每次10分钟，最后将细胞滴于载玻片上Isl。玻片37老化数天后，平铺于60恒温水浴锅平面上，玻片上盖满2 X SSC溶液(0.3 M氯化钠和0.03 M拘橡
5、酸钠），15 W紫外灯距玻片6 cm照45分钟。蒸馏水冲洗后，5务Giemsa染色，水洗干燥后镜检分析l70结果和讨论图1示吸附IdUrd的活性炭悬浮液一次注射的小鼠骨髓细胞SCE图象。各组小鼠骨髓细胞的SCE观察结果见表toWang Renli et al.: A New Technique for in vivoObservation of SCE协Mouse Bone Marrow Celts呼I由表1可知，随IdUrd剂量的增加，SCE值相应增加。经统计学处理，求得两者相关系数！为0.9842, df = 4, P0.05，表明两变量间存在显著相关。以X表示IdUrd的不同剂量，Y表示
6、不同剂量时各组小鼠平均每个细胞SCE值，进行迥归分析，得担归系数b一0.09960，直线回归方程为夕= 2.940.09960X（图2)o如将SCE细胞作为描述突变率的重要参数，则说明作为观察SCE的核营类似物IdUrd本身就具有一定的诱变性。在用活体SCE作为检测化学物质遗传效应的指标时，应考虑到基准SCE率，为了排除IdUtd本身诱发的SCE导致基准SCE率增加，应使用尽可能低剂量的IdUrd o根据我们的实验结果以15-20 mg为适宜。将本实验IdUrd 40 mg剂量组骨髓细胞SCE与张忠恕等用BrdUrd 34 mg多次注射的骨髓细胞SCEII作一比较，经换算IdUrd和Brd-U
7、rd微克分子数相同，而两者的SCE值分别为6.89和2.76，相差达一倍以上。已有实验证明BrdUrd可以诱发SCE l6)，因而上述相异除了可能与方法学不同有关外，说明与BrdUrd相比，IdUrd可能诱变性更强。参考文献1张忠恕等：1980，生殖与避孕，创刊号，522Allen, J. W.S. A. Latt: 1976. Nature, 260:449-451【3Allen, J. W., C. F. Shuler et al.: 1977. Cytogene-ticsCell Genetics, 18: 231-237.4Kanda, N.H. Kato: 1979. Bxperim
8、ential CellResearch, 118: 431-434.5Ikushima, T.: 1974. ibid., 87: 15.6Lambert, B., K. Hansson et al：1976. Hereditas,83：163-174.7Marquardt, H.U. Bayer：1977. Mutation Be-search, 56：169-1768 1 Pedro, M. R.: 1980. ibid., 74: 61-79.图1 30 mg MUM活性炭悬浮液注射后小鼠健髓细胞SCE,图象（(6次互换）表1小鼠活体骨髓细胞SCE:频率组别IdUrd剂量(mg)动物数观察细胞数SCE总数每个细胞SCI:t测验平均SCE士SE范围III班IVV阳性对照（环磷酞胺）101520304020333333757575757530633434446151727534.08士0.17 084.45士0.23 1-124.59士0.26 2一II6.15士0.31 1一156.89士0.32 3-1836.71士1.12 23-75P0.05P0.05P0.01P0.01PK 0.01r=0.9842Y=2.94k0.09960X产理思令墉山口们IdUrd剂量(-8f每个小鼠图2 IdUrd (X）与SCE值（Y）的相关与迥归线42
