1、 北京百泰克生物技术有限公司 BioTeke Corporation 地 址：北京市留学人员创业园 电 话：010-62951781 传真：010-62951781 网 址： Email: 一般实验室使用， 仅用于 体外 PLANTeasy植物RNA提取试剂 用于富含多糖、多酚植物总RNA抽提 目录号：RP2301（20ml） 目录号：RP2302（50ml） 使用手册 2005年9月，第2版 北京百泰克生物技术有限公司 Bioteke Corporation 【百泰克生物】定货热线：010-62951781 Email: -1- 常见问题及解决办法： 问题 原因 解决方法 RNA 得 率
2、低 样品研磨不充分 样品未与试剂充分混合样品 RNA 含量少 尼龙膜堵塞 将样品充分研磨成粉末 充分振荡，彻底混合样品 每 ml 提取液加 1l glycogen（20g/l）有助 RNA 沉淀 可使用纱布过滤 RNA 降 解 样品储存方法不当 加入试剂前样品已解冻 样品收集后或需长期保存时 应置于70 样品应一直保持70直至加入试剂并悬浮 A260/A280比率低 RNA 溶于水 将 RNA 溶于 10mM Tris-HCl(pH7.5)进行紫外检测 废弃物有异味 本试剂中含-巯基乙醇 废弃物用水稀释，加几毫升 3双氧水，过夜，用碳酸氢钠调 pH 降低酸性 PLANTeasy 植物 RNA
3、提取试剂 产品简介： RNAplant 试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中， （如马铃薯块茎，白松松针或嫩苗，和西红柿叶等） ，提取高纯度的总 RNA。每 100 ml 可处理 100 mg 组织 200 次，处理 5 g 组织 4 次。 保存条件： 室温运输，4保存，可保存 6 个月。 预防 RNase 污染，应注意以下几方面： 1 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。 2 使用灭过菌的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3 RNA 在 TRIpure 试剂中时不会被 RNase 污染。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻
4、璃器皿可在 150烘烤 4 小时，塑料器皿可在 0.5M NaOH 中浸泡 10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除 RNase。 4 配制溶液应使用无 RNase 的水。 （将水加入处理过不含 RNase 的玻璃瓶中，加入 DEPC 至终浓度 0.1v/v，放置过夜，高压灭菌） 。 【百泰克生物】定货热线：01062951781 Email: 【百泰克生物】定货热线：01062951781 Email: -4- -1- 【百泰克生物】定货热线：01062951781 Email: 【百泰克生物】定货热线：01062951781 Email: -2- -3- 准备试剂 ：液氮，研钵，无
5、RNase 离心管，5M NaCl，氯仿，异丙醇，75乙醇，无 RNase 水。 样品处理： 1、 先将无 RNase 离心管置于干冰中再放入冷冻的组织样品。 2、 准备新鲜植物组织，在液氮中研磨成粉状，如果是干种子，可在室温研磨。 3、 处理过的植物材料应一直保持置于70 冷冻保存，直至加入提取试剂并悬浮。 小规模提取操作步骤： （样品0.1g 到 5g，使用大量提取方法） ： 1. 每 1 克冷冻的研磨过的植物组织，加 5ml 试剂，振荡至彻底混匀。 2. 室温放置 5 分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。 3. 4 2600 g 离心 5 分钟，上清用 100m 尼龙滤膜或纱布过滤，转
6、入新的无 RNase 离心管。 4. 每 10ml 上清加 2ml 5M NaCl，混匀。 5. 每 10ml 上清加 6ml 氯仿，上下颠倒混匀。 6. 4 2600 g 离心 30 分钟，取上层水相转入新的无 RNase 离心管。 7. 测量所得水相体积，加 0.9 倍体积异丙醇，混匀，室温放置 10 分钟。 8. 4 2600 g 离心 30 分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加 510ml 75乙醇。 9. 4 2600 g 离心 5 分钟。小心倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出弃掉。 10. 加无 RNase 水，吹打几次以溶解 RNA（如，5g 种子可加 250l 水， 5g叶片可加 500l 水） 。如有絮状物，可室温 12,000g 离心 1 分钟，取上清转入干净的无 RNase 离心管中，70保存。
