1、Page 1 of 2 GTpureTM口腔细胞DNA提取试剂盒 一、试剂盒组成 Cat.NO. 566-050离心柱C294 50收集管C947 50 DR Buffer 20mlPE Solution 30mlWA Buffer 10mlDE Buffer 15mlProteinase K干粉 11mgRNase A solution 30l2说明书 1份二、产品说明 规格 离心柱型 口腔细胞收集方法 漱口水或拭子 产量 1-6g/单次漱口水，0.5-3g/单个拭子 离心柱最大载量 800l 操作时间 单次制备30分钟 下游应用 限制性酶切、PCR和基因型分析等 三、注意事项 1 Prot
2、einase K干粉需4度保存，溶解后于-20度保存。 2 RNase A溶液于4度或-20度保存。 3 口腔细胞样品要在进食或饮水后至少30分钟取样。早餐前取样可获得最高的产量。 四、实验准备 1向Proteinase K干粉中加入0.275ml灭菌ddH2O和0.275ml甘油，温和颠倒直至完全溶解，请勿漩涡振荡，置于-20度保存。也可选择，向每管Proteinase K干粉中加入0.55ml灭菌ddH2O，分装成小等份于-20度或-80度保存，避免反复冻融。要保证蛋白酶K完全溶解，一般在室温下需要15至30分钟。 2在温度较低时注意观察DR和PE中是否有沉淀，如有请将缓冲液在37度温育溶
3、解。 3. 请准备60水浴或其它加热设备 4在实验开始前取适当体积的DE Buffer 在70度预热。 5向WA Buffer 中加入40ml无水乙醇（96-100%）。 五、操作步骤 【从漱口水中提取口腔细胞DNA】： 1 采用10ml水或生理盐水漱口1分钟收集口腔细胞，将漱口水吐进50ml离心管中。 要求样品提供者在样品收集前至少30分钟内不能进食及饮水。早餐前取样可获得最高产量。 如果使用超过10ml的漱口水，应按比例增加DR Buffer、Proteinase K，PE Buffer和乙醇的使用体积。 2 将50ml离心管置于4度4000g离心5分钟，用移液器吸除尽可能多的上清而不破坏
4、细胞沉淀。 Page 2 of 2 3 用300l DR Buffer重悬细胞沉淀，反复抽吸10-20次至完全混匀，转移细胞悬液至2ml离心管中。 确保在细胞悬液中无可见小块可使DNA产量最大化。 4 加入10l Proteinase K，旋涡10-15秒混匀，并在60度孵育混合物15分钟，孵育后简短离心混合物。 5 加入1l RNase A，室温下放置3分钟去除RNA。 6 加入300l PE Solution，颠倒5-10次混匀，16000g离心3分钟。 如果离心机转速达不到16000g，可延长离心时间。 7 小心转移上清至一个新的1.5ml离心管中，加300l无水乙醇，颠倒10-15次，
5、彻底混匀。 8 将离心柱C294放入一个收集管中。 9 向离心柱内加入以上混合物，6000g离心30秒，弃废液，将离心柱放回收集管中。 如果样品体积大于800l，先加入800l至离心柱，离心弃废液，再重复此操作转移剩余样品。 10加入500l WA Buffer，6000g离心30秒。弃废液，将离心柱放回收集管中。 确保WA Buffer中加有乙醇。 1116000g再次离心1分钟。 再次离心是为了充分去除残留在吸附膜上的乙醇，乙醇残留可能抑制下游实验。 12将离心柱放入一个洁净的1.5ml离心管中。 13向离心柱的膜中央加入200l 70度预热的DE Buffer，放置1分钟。 146000
6、g离心30秒收集基因组DNA。 洗脱DNA可于4度保存1或1天，长期保存应放在 -20度。 【从拭子中提取口腔细胞DNA】： 1 将一个洁净的拭子伸入口腔，在面颊内侧一处不断擦拭，擦20次收集口腔细胞。 使用专门的口腔拭子或棉签收集口腔细胞。 用滚动摩擦的方式擦拭可收集最大量的细胞。 2 将擦拭过的拭子置于2ml离心管内，用干净的剪刀将拭子头从杆上剪下。 3 加入300l DR Buffer，接着加入10l Proteinase K ，旋涡10-15秒混和，1000g简短离心几秒后，将混合物于60度孵育15分钟。 4 1000g简短离心几秒。 5 从混合物中去除拭子头。将拭子头向离心管内壁挤压
7、，获得尽可能多的液体。 6 去除拭子头后，加入1l RNase A solution，室温放置3分钟去除RNA。 7 加入300l PE Solution，颠倒5-10次混匀，16000g离心3分钟。 如果离心机转速小于16000g，可延长离心时间。 8 小心转移上清至1个新的1.5ml离心管内，加入300l无水乙醇，颠倒10-15次彻底混匀， 9 将离心柱放入收集管内，将样品加入离心柱内，6000g离心30秒。弃废液，将离心柱放回收集管中。 如果样品体积大于800l，先加入800l至离心柱，离心弃废液，再重复此操作转移剩余样品。 10加入500l WA Buffer，6000g离心30秒。弃废液，将离心柱放回收集管中。 确保WA Buffer中加有无水乙醇。 1116000g再次离心1分钟。 再次离心是为了充分去除残留在吸附膜上的乙醇，乙醇残留可能抑制下游实验。 12将离心柱放入一个洁净的1.5ml离心管中。 13向离心柱的膜中央加入200l 70度预热的DE Buffer，放置1分钟。 146000g离心30秒收集基因组DNA。 洗脱DNA可于4度保存1或1天，长期保存应放在 -20度。 生产商：基因科技（上海）有限公司 地 址：上海市桂箐路69号25号楼6楼 电 话：02151876181 传 真：02164957610 网 址：
