1、中西医结合临床专业毕业论文 精品论文 槐耳清膏诱导肝癌小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究关键词：肝癌 槐耳清膏 细胞凋亡摘要：背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20 年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生
2、长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。
3、在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐
4、耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清
5、膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高
6、于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长；
7、 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。正文内容背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20 年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，
8、取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达
9、 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A
10、 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植
11、瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的
12、 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用；
13、 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选
14、提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：
15、单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H
16、22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内
17、抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白
18、 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌
19、 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用
20、。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善
21、非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠
22、移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 4
23、8h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异
24、有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax
25、 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善
26、临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，
27、改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-77
28、21 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml
29、 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-F
30、u 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05
31、)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种
32、西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗
33、能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT
34、法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓
35、度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显
36、示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照
37、组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高
38、发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能
39、显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用； 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作
40、用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 S
41、MMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。
42、 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐
43、耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因蛋白表达作用明显，认为槐耳清膏可能通过诱导荷瘤小鼠移植瘤组织细胞凋亡，抑制肿瘤生长。背景 原发性肝癌(PLC)已成为我国第二位恶性肿瘤病因，是最常见的恶性肿瘤之一。统计资料表明，全世界每年新发肝癌病例约 45在我国大陆。近 20年来，
44、我国肝癌死亡率增加了 41.7，可见我国肝癌高发的趋势已十分严峻。研究发现，中医中药配合各种西医常规方法治疗中晚期原发性肝癌，具有明显改善临床症状及体征，提高生存质量，延长生存期等作用。近年来，加大了对中药的开发力度，从中药中筛选提纯出有形成份，如中药多糖，进行抗肿瘤实验，取得了一定的进展，为中药抗癌提供了一条途径。 槐耳是生长在老龄中国槐树干上的一种药用真菌-槐栓菌(Trametesrobiniophila Murr)，其主要抗癌活性成分为蛋白多糖(PS-T)。现已有其成品-金克槐耳颗粒(国家一类新药)应用于临床。综合现代文献报道，槐耳颗粒在临床上已广泛应用于多种肿瘤的治疗，并取得了一定的疗
45、效：1、消化系统肿瘤：槐耳配合常规化疗方案，能显著提高胃癌术后的 5 年生存率；槐耳配合化疗能提高大肠癌术后患者的免疫功能，减轻化疗毒性，改善造血功能；2、呼吸系统肿瘤：槐耳能显著改善非小细胞肺癌患者的免疫功能；3、血液肿瘤方面：单用槐耳治疗慢性粒细胞性白血病的总有效率可达 80；4、其它肿瘤：槐耳对乳腺癌肿瘤也有良好的疗效。在阐述其抗肿瘤机制方面，也有进行了大量的实验研究。目前已有的槐耳作用于肝癌的基础实验表明，槐耳在体外可直接作用于肝癌细胞并诱导其凋亡，本实验将在此基础上，进一步研究槐耳诱导肝癌细胞凋亡的作用。 目的 1、体外观察槐耳清膏对人肝癌 SMMC-7721 细胞株的生长抑制作用；
46、 2、观察槐耳清膏对肝癌小鼠移植瘤细胞的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法 1、MTT 法检测槐耳清膏在体外对肝癌细胞 SMMC-7721 细胞株的抑制率； 2、观察槐耳清膏对小鼠移植瘤的抑制作用及其诱导凋亡作用 皮下注射 H22 小鼠肝癌细胞，造荷瘤小鼠的模型，分为 A 组(空白对照组)、B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)、D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)，用药结束后，称瘤重，计算抑瘤率；HE 染色，观察瘤组织的病理学改变；TLINEL 法检测各组肿瘤组织凋亡率；用免疫组织化学的方法检测移植瘤细胞组织相关凋亡蛋白 Bcl-2、Bax 的表达，初步探讨其诱导凋亡的可能机制。 结果
47、 1、体外抑制细胞增殖实验：槐耳清膏对肝癌 SMMC-7721 细胞有明显的抑制作用，且随浓度增加而上升，呈剂量-效应关系，10mg/ml 槐耳清膏组与 5mg/ml 槐耳清膏组的 48h 抑制率分别达到 65和 55。 2、体内抑制肿瘤生长实验：A 组(对照组)荷瘤小鼠移植瘤重量明显大于 B 组(5-Fu 组)、C 组(槐耳清膏组)和 D 组(槐耳清膏+5-Fu 组)(P0.05，P0.05，P0.05)，B，C，D 组抑瘤率分别为31.2，27.1，47.5，提示槐耳清膏在体内具有抑制肿瘤生长的作用；且D 组抑瘤率明显高于 B，C 组，差异有统计学意义(P0.05)，提示槐耳清膏联合 5-
48、Fu 用药，可提高 5-Fu 抑制肿瘤的效果。 3、TUNEL 法肿瘤组织细胞凋亡率的检测显示，凋亡率由高到低依次为：槐耳清膏联合 5-Fu 组、槐耳清膏组、5-Fu 组、对照组，差异有统计学意义(P0.05)。 4、相关凋亡蛋白 Bcl-2的测定，免疫组化结果显示：对照组的 Bcl-2 阳性表达率为 43.022.05，明显高于 5-Fu 组、槐耳清膏组、槐耳清膏联合 5-Fu 组的阳性表达率，差异有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏可下调荷瘤小鼠瘤组织细胞 Bcl-2 蛋白的表达。 5、相关凋亡蛋白 Bax 的测定，免疫组化结果显示：槐耳清膏联合 5-Fu 组的 Bax 阳性表达率 87.889.72，高于对照组、5-Fu 组、槐耳清膏组，差异有统计学意义(P0.05)；对照组与槐耳清膏组的差异没有统计学意义(P0.05)，表明槐耳清膏联合 5-Fu 可增强 Bax 蛋白的表达。 结论 1、槐耳清膏在体外对肝癌 SMMC-7721 细胞有抑制其生长的作用； 2、槐耳清膏在体内可通过诱导凋亡抑制小鼠移植瘤生长； 3、槐耳清膏可下调 Bcl-2 基因蛋白表达，联合 5-Fu 上调 Bax 基因
