1、 GB 31660.6 2019 2019-09-06 发布 2020-04-01 实施 食品安全 国家标准 动物性食 品中 5 种 2-受体激动 剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱 法 National food safety standard-Determination of five kinds of alpha-agonists residues in animal derived food by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 发布 GB31660.6 2019 I 前 言 本标准 系首 次发 布。GB316
2、60.6 2019 1 食品安全 国家标 准 动物性食 品中 5 种 2-受体激动剂残 留 量的测定 液相色谱-串联质 谱 法 1 范围 本标准 规定 了动 物性 食品 中5种2-受体 激动 剂 的 制样 和液相 色谱-串联 质谱 测定 方法。本标准 适用 于猪 肌肉、肝 脏和肾 脏组 织及 鸡肌 肉和 肝脏组 织中 替扎 尼定、赛 拉嗪、溴 莫尼定、安普 乐定 和可 乐定 残留量 的测 定。2 规范性引用文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡是 注 日期的 引用 文件，仅所 注 日期的 版本适用于 本文 件。凡是 不注 日 期的引 用文 件，其最 新版 本（包括 所有
3、的修 改单）适 用 于本文 件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 3 原理 试 样中 残留 的 2-受 体激 动剂，用 碳酸 钠缓 冲溶 液、乙 酸乙 酯提 取，固相 萃取柱 净化，液相色 谱-串联质 谱测 定，外标法 定量。4 试剂和材料 除另有 规定 外，所有 试剂 均为分 析纯，水 为符 合GB/T 6682 规 定的 一级 水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.3 甲醇（CH3OH）。4.1.4 氨水（NH4OH）。4.1.5 无水 碳酸 钠（Na2CO3）。4.1.6 碳酸 氢钠（NaHC
4、O3）。4.1.7 乙酸 乙酯（CH3COOC2H5）。4.2 溶液 配制 4.2.1 碳酸 钠溶 液：取无 水碳酸 钠 10.6 g，用 水溶 解并稀 释 至 100 mL。4.2.2 碳酸 氢钠 溶液：取 碳酸氢 钠 8.4 g，用 水溶 解 并稀释 至 100 mL。4.2.3 碳酸 钠缓 冲溶 液：取碳酸 钠溶 液 90 mL、碳酸氢钠 溶 液 10 mL，混匀，现用 现配。4.2.4 甲酸 溶液（0.2）：取甲 酸 1 mL，用水溶解 并稀释 至 500 mL。4.2.5 甲酸-乙腈 溶液：取 0.2%甲 酸溶 液 80 mL，加乙腈 20 mL，混匀。4.2.6 氨水 甲醇 溶液（
5、5）：取 氨 水 5 mL，用甲醇 溶解并 稀释 至 100mL。4.3 标准 品 盐酸 替 扎 尼 定（Tizanidine hydrochloride,C9H8ClN5S HCl,CAS:64461-82-1）、盐 酸 赛 拉 嗪（Xylazine Hydrochloride,C12H16N2S,CAS:7361-61-7）、溴莫 尼 定（Brimonidine,C11H10BrN5,CAS:59803-98-4）、盐 酸 安 普 乐 定（Apraclonidine hydrochloride,C9H10N4Cl2 HCl,GB31660.6 2019 2 CAS:73218-79-8）和
6、盐酸 可乐定（Clonidine hydrochloride,C9H10Cl3N3,CAS:4205-91-8）：含量均 98%。4.4 标准 溶液 制备 4.4.1 标准 贮备 液：取盐酸 替扎 尼定、盐酸 赛拉嗪、溴 莫尼 定、盐酸 安普 乐 定和盐 酸可 乐定标准品各约 10mg，精 密称 定，分 别于 10 mL 量瓶中，用甲 醇溶 解并 稀释 至刻 度，配 制成 浓度均为 1 mg/mL 的盐酸 替扎尼定、盐 酸赛 拉嗪、溴 莫尼定、盐 酸安 普乐 定和 盐酸可 乐定 标准贮备 液。28 保 存，有效 期 6 个 月。4.4.2 混合 标准 工作 液：分别精 密量 取上 述标 准贮
7、备液 各 1 mL，于 100 mL 量瓶中，用 甲醇溶解 并稀 释至 刻度，配 制成浓 度 为 10 g/mL 的混合标准 工作 液。于 28 保存，有 效期1 个月。4.4.3 标准曲线制备：分别精密量取 混合标准工作液适量，用 甲酸-乙 腈溶液 稀释配制成 浓度为0.5、1、10、50 和100 g/L 系列混合标 准工 作液，临用 现配。4.5 材料 4.5.1 固相 萃取MCX 柱：60mg/3mL，或相当者。4.5.2 滤膜：有 机相，0.22 m。5 仪器和设备 5.1 液相色 谱-串联质 谱仪：配 电喷雾 电离 源。5.2 分析天 平：感量 0.00001 g 和 0.01 g
8、。5.3 均质机。5.4 离心机。5.5 涡旋振 荡器。5.6 旋转蒸 发仪。5.7 固相萃 取装 置。5.8 鸡心瓶。5.9 离心管：50 mL。6 试料的制备与保存 6.1 试料 的制 备 取适量 新鲜 或解 冻的 空白 或供试 组织，绞 碎并 使均 质。取 均质 的供 试样 品，作为供 试试 料。取 均质 的空 白样 品，作为空 白试 料。取 均质 的空 白样 品，添加适 宜浓 度的 标准 工作 液，作 为空 白添 加试 料。6.2 样品 的保 存-20以下保 存。GB31660.6 2019 3 7 测定步骤 7.1 提取 取试料2 g（准确 至20mg），于50 mL 离心管中，加碳
9、酸 钠缓 冲液5 mL，振荡混匀，加乙酸 乙酯10 mL，充分振荡，于8000 r/min 离心5 min，取上清液 于鸡 心瓶 中，下层 溶液 中加乙酸 乙酯10 mL 重复提取 一次，合 并两 次上 清液。于55 旋转 蒸发 至干，加 甲酸-乙腈溶 液4.0mL 溶解残余 物，备用。7.2 净化 MCX 柱 依次 用甲 醇、水各3 mL 活化。取备用 液过 柱，用水3 mL、甲醇3 mL 分 别淋洗，挤干，氨水 甲醇 溶液6 mL 洗脱，收集 洗脱 液，于60 旋转蒸 发至 干，用甲 酸-乙腈溶液1.0 mL溶解残 余物，滤 过，液相 色谱-串联质 谱测 定。7.3 测定 7.3.1 色谱
10、 条件 a）色 谱柱：C18（100 mm 3.0 mm，粒径 1.8 m），或相当 者；b）柱 温：30；c）进 样量：10 L；d）流 速：0.3 mL/min；e）流 动相：A：乙 腈；B：0.2 甲 酸溶 液，梯度 洗 脱程序 见 表 1。表1 梯度洗脱程序 时间 min A：乙腈%B：0.2%甲 酸溶 液%0.0 10 90 3.0 30 70 4.0 30 70 4.5 80 20 5.5 80 20 5.6 10 90 7.3.2 质谱 条件 a）离 子源：电 喷雾 离子 源；b）扫 描方 式：正离 子扫 描；c）检 测方 式：多反 应监 测；d）离 子源 温度：150；GB31
11、660.6 2019 4 e）脱 溶剂 温度：500；f）毛细 管电 压：3.0 V；g）定 性离 子对、定 量离 子 对及锥 孔电 压和 碰撞 能量 见表 2。表 2 5 种 2受 体激 动剂 类药物 的质 谱参 数 被测物 名称 定性离 子对 m/z 定量离 子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能 量 eV 替扎尼 定 254.144.1 254.144.1 38 22 254.1210.0 30 赛拉嗪 221.190.0 221.190.0 30 22 221.1164.0 26 溴莫尼 定 292.2170.2 292.2212.3 40 35 292.2212.3 30 安普乐 定 2
12、45.2174.2 245.2174.2 40 28 245.2209.2 20 可乐定 230.0160.0 230.0213.0 43 34 230.0213.0 24 7.4 测定 法 7.4.1 定性 测定 在同样 测试 条件 下，试样 液中 2-受体激 动剂 的保 留 时间与 标准 工作 液中 相 应 2-受体激 动剂的 保留 时间 之比，偏 差在 5%以内，且检 测到 离子的 相对 丰度，应 当与 浓度相 当的 校正标准溶 液相 对丰 度一 致，其允许 偏差 应符 合 表 3 要 求。表 3 定性 确证 时相 对离 子 丰度的 最大 允许 误差 相对离 子丰 度%50 2050 1
13、020 10 允许的 最大 偏差%20 25 30 50 7.4.2 定量 测定 取试样 溶液 和相 应的 标准 工作液，按外 标法 以峰 面 积定量，标准 工作 液及 试 样溶液 中的2受体激 动剂 类 响 应值 均 应在仪 器检 测的 线性 范围 内。在 上述 条件 下，2受 体激动 剂 标 准溶液特征 离子 质量 色谱 图见 附录A。7.5 空白试 验 除不加 试料 外，采用 完全 相同的 步骤 进行 平行 操作。8 结果计算和表述 试料中 待测 药物 的残 留量 按式（1）计算：GB31660.6 2019 5 m AV A CXss（1）式中：X 供 试试 料中 相应 的 2受体激
14、动剂 类药 物残 留 量，单 位为 微克 每千 克（g/kg）；Cs 标 准溶 液中 相应 的 2受体 激动 剂类 药物 浓度，单位 为微 克每 升（g/L）；A 试 样溶 液中相 应 的 2受体 激动 剂类 药物 的色 谱 峰面积；As 标准 溶液 中相 应 的 2受体激 动剂 类药 物 色 谱峰面 积；V 溶 解残 余物 所用 的 溶液体 积，单位 为毫 升（mL）；m 供 试试 料质 量，单 位为克（g）；计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9 检测方法灵敏度、准 确度 和精密度 9.1 灵敏 度 本方法 的检 测限 为0.5 g/kg，定 量限
15、为1 g/kg。9.2 准确 度 本方法 在1 100 g/kg 添加 浓度水 平上 的回 收率 为60 100。9.3 精密 度 本方法 批内 相对 标准 偏差 15%，批 间相 对标 准偏 差 20%。GB31660.6 2019 6 附 录A（资料 性附 录）特征离 子质 量 色 谱图 图 A.1 10 g/L 2受体激 动剂类药物标准溶液 特征 离子质量色谱图 1-赛拉 嗪特 征离 子质 量色谱 图（221.190.0）2-可乐定 特征 离子 质量色 谱图（230.0213.0）3-替扎 尼定 特征 离子质 量色 谱图（254.144.1）4-溴莫 尼定 特征 离子质 量色 谱图（292.2212.3）5-安普 乐定 特征 离子质 量色 谱图（245.2174.2）
