1、营养与食品卫生学专业优秀论文 三羟异黄酮对 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞辐射敏感性的影响及其机理研究关键词：三羟异黄酮 放射治疗 乳腺癌细胞 辐射敏感性 蛋白酪氨酸激酶 丝裂原活化蛋白激酶 erbB-2 基因摘要：乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具
2、有PTK 活性。研究发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的
3、关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损 DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 H
4、ER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌
5、细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞24h，MTT 检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/
6、L 和 10mol/L 时表现为增殖抑制作用。 3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异(pgt;005)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细
7、胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h，免疫印迹和 PCR 分析，发现 P-Akt 蛋白和 mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱
8、；提示：三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用。三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。正文内容乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近
9、20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有PTK 活性。研究发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一
10、种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损 DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 H
11、ER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌
12、细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺
13、癌细胞24h，MTT 检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/L 和 10mol/L 时表现为增殖抑制作用。 3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异
14、(pgt;005)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24
15、h，免疫印迹和 PCR 分析，发现 P-Akt 蛋白和 mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱；提示：三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu
16、 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用。三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有 PTK活性。研究
17、发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。 三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发
18、现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高
19、表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HE
20、R-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞24h，MTT 检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/L 和 10mol/
21、L 时表现为增殖抑制作用。 3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异(pgt;005)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有
22、抵抗作用，但三羟异黄酮可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h，免疫印迹和 PCR 分析，发现 P-Akt 蛋白和 mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱；提示：三羟异黄酮可
23、能是通过抑制 HER-2/neu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用。三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病
24、率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有 PTK活性。研究发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。 三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大
25、量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺
26、癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p
27、53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞24h，MTT 检测发
28、现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/L 和 10mol/L 时表现为增殖抑制作用。 3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异(pgt;005)，而三羟异
29、黄酮联合射线组的凋亡率分别增加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h，免疫印迹和 PCR 分析
30、，发现 P-Akt 蛋白和 mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱；提示：三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用
31、。三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有 PTK活性。研究发现 HER-2/neu 高
32、表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。 三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受
33、体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细
34、胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的
35、 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞24h，MTT 检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/L 和 10mol/L 时表现为增殖抑制作用。
36、3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异(pgt;005)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强
37、 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h，免疫印迹和 PCR 分析，发现 P-Akt 蛋白和 mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱；提示：三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/n
38、eu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用。三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康
39、的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有 PTK活性。研究发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。 三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具
40、有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分
41、子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、
42、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340mol/L)三羟异黄酮处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞24h，MTT 检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞
43、的增殖能力均有影响，对 MDA-MB-453 细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50 约为 100mol/L；对 MCF-7/HER-2 和 MCF-7 细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于 40mol/L 和 10mol/L 时表现为增殖抑制作用。 3100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h 后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2 细胞的射线组凋亡率，无显著差异(pgt;005)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增
44、加 3263(plt;005)、4736(plt;005)；MCF-7 细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加1290(plt;005)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(pgt;005)。提示 HER-2/neu 高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453 细胞、MCF-7/HER-2 细胞的凋亡作用。 4100mol/L 三羟异黄酮联合或单独 10Gy 射线处理 MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7 三种乳腺癌细胞 24h，免疫印迹和 PCR 分析，发现 P-Akt 蛋白和
45、mRNA 表达减弱，而 HER-2和 Akt 均没有变化在三种细胞中；在 MCF-7/HER-2 细胞中，p53 蛋白和 mRNA 表达量增强；在 MDA-MB-453 细胞中 p21 蛋白和 mRNA 表达增强，而 ERK2 则表达减弱；提示：三羟异黄酮可能是通过抑制 HER-2/neu 的 TPK 活性，阻断其介导的PI3K/AKT 和 MAPK 的激活，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的辐射敏感性。 上述结果提示：三羟异黄酮对人乳腺癌细胞有增殖抑制作用，该作用存在一定的剂量-效应关系；并可增强 射线诱导 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的凋亡作用。三羟异黄酮可能是通过抑制
46、HER-2/neu 的 PTK 活性，阻断其介导 PI-3K和 MAPK 信号通路的激活，增强 HER-2/neu 高表达人乳腺癌细胞的辐射敏感性。乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近 20 年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，2530的患者 HER-2/neu 受体高表达。HER-2/neu 由原癌基因 erbB-2/neu 表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有 PTK活性。研究发现 HER-2/neu 高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生
47、长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu 在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。 三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制 PTK 活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体 PTK 活性的 HER-2/neu 与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗 HER-2/neu 受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明
48、显受抑，降低受损DNA 修复能力，增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现 HER-2/neu 低表达者复发率低，用放疗与阻断 HER-2/neu 受体或抑制其 PTK 活性联合方法可显著降低 HER-2/neu 高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。 基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7(ER+，HER-2/neu 低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu 高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立 HER-2/neu 高表达的 MCF-7 乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MT
49、T 实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和 射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR 等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞 Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA 及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强 HER-2/neu 高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制 主要研究结果和结论如下： 1通过质粒转染技术将 pCMV/ERBB2 质粒和 pCIneo 质粒共转染入MCF-7 乳腺癌细胞，成功建立 HER-2/neu 稳定高表达的 MCF-7 细胞(命名为 MCF-7/HER-2)。 2分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，22
