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骨髓片组化染色.doc

1、PAS(糖原)1. 固定 PAS 髓片用甲醇固定 10min(或糖原固定液 5min),水洗2. PAS加血膜覆盖,置 10min,水洗干燥3. 加 PAS液(雪夫试剂)10ml 于试管,玻片插入置 37 水浴箱暗处,30-45min 后水洗(水下冲 10min,干燥)4. 复染:苏木素复染 3min,水洗,干燥结果判读(-)胞质无红色(+/-)少量红色颗粒 1-3 个(+)少量红色颗粒 4-10 个(+)红色颗粒10 个(+)暗红色粗大颗粒(+)紫红色粗大颗粒附:原单:胞浆边缘或伪足呈颗粒状原粒:胞质内均匀弥散细小颗粒原淋:粗大颗粒(核周)阳性程度:粒2% M1M4(+)=2% M5,ALL

2、AE:非特异性酯酶. 固定 玻片先用甲醛固定 10min,水洗,干燥2. A 0.005gAE 萘酚0.5ml 丙酮(先加)0.5ml 丙二酮(再加)B 取锥形瓶,加入 PH7.0AE 缓冲液 20ml. 用吸管吸取 A 液慢慢滴加入 B 瓶内,边加边摇晃锥形瓶. 加入坚固兰 0.02g 充分混匀后再分为 a,b 两管。A 管 10ml 插入 AE 玻片,b 管加入0.015gNAF,插入 +NAF 玻片,37水浴 1h,放在流水下冲洗 10min,待干. 复染 苏木素复染 5min,水洗,干燥附:AE 缓冲液配制(PH7.0 )61mlNa2HPO4+39mlKH2PO4 混匀待用结果判读:

3、(-)无蓝色颗粒(+/-)少量稀疏蓝色颗粒(+)胞质 1/2 区域出现颗粒沉淀(+)胞质 3/4 区域出现颗粒沉淀(+)胞质全部颗粒沉淀(+)胞质全部浓集颗粒沉淀抑制率趋势:030% 70%100%M1-M3 M4 M5不抑制 部分抑制 受抑制组化染色步骤PAS(糖原):、固定 PAS 髓片用甲醇固定 10min(或糖原固定液 5min),水洗、干燥、PAS加膜覆盖,置 10min,水洗干燥、加 PAS液(雪夫试剂)10ml 于试管,玻片插入置 37 水浴箱暗处,30-45min 后水洗(水下冲 10min,干燥)、复染:苏木素复染 5min,水洗,干燥(过氧化物酶):、POX液铺满玻片,小玻

4、片滴,大玻片滴、滴 H2H2O(蒸馏水) ,混匀后直接加于上步玻片上(:比例) ,混匀,后水洗、干燥、乙醇脱色,水洗,干燥 、复染:瑞氏染色,水洗,干燥 CE(特异性酯酶):、固定 用 AKP 固定液固定S,水洗,干燥、液 0.萘酚 0.-二甲酰胺 混匀使溶解B 液 先加付品红滴 NO滴 .缓冲液A 液与 B 液倾倒混匀次、玻片插入试管后放水浴,放在流水下冲洗,待干、复染 苏木素复染,水洗,干燥附:CE 缓冲液配制(PH7.6 ) Na2HPO4 87ml+KH2PO4 13ml 混匀AE(非特异性酯酶):、固定 玻片先用甲醛固定 10min,水洗,干燥、液 0.005gAE 萘酚 0.5ml 丙酮(先加) 0.5ml 丙二酮(再加)B 液 取锥形瓶,加入 PH7.0AE 缓冲液 20ml、用吸管吸取 A 液慢慢滴加入 B 瓶内,边加边 摇晃锥形瓶、加入坚固兰 0.02g 充分混匀后再分为 a,b 两管。a 管 10ml 插入 AE 玻片,b 管加入 0.015gNAF,插入+NAF 玻片,37水浴 1h,放在流水下冲洗 10min,待干5 复染 苏木素复染 5min,水洗,干燥附:AE 缓冲液配制(PH7.0) 61mlNa2HPO4+39mlKH2PO4 混匀待用

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