1、MS培养基母液的配制:20 HMs 大量元素(1 L): 38 g KNO3, 33 g NH4NO3, 8.8 g CaCl 2 2H2O, 7.4 g MgS0 4 7H2O, 3.4 g KH 2P04。200MS 微量元素(1 L): 0.166 g KI , 1.24 g H3BO3, 4.46 g MnS0 4 4H2O, 1.72 g ZnS0 4 7H2O, 0.05 g Na 2M004 2H2O, 0.005 g CuS0 4 5H2O, 0.005 g C0CI2 6H20。200 MS维生素和氨基酸(1 L) : 20 g肌醇，0.1 g烟酸，0.1 g盐酸叱哆醇 (V
2、B6) , 0.02 g 盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1) , 0.4 g 甘氨酸。200MS 铁盐(1 L): 5.56 g FeSO 4 - 7H2。，7.46 g Na 2EDTA -2H20,先溶 于500 mL ddH 20,加热，调pH至5.5,定容至1 L。汪忠：配制大量元素母液时，为避免产生沉淀，要用纯度高的重蒸储水溶解，药品 采用分析纯。化学药品先以少量重蒸储水充分溶解后然后混合， 混合时需注意边 搅拌边混合。CaC12 2H20要在最后单独加入，在溶解 CaC12 2H20时，蒸储水 需加热沸腾，除去水中的C02,以防沉淀。配制铁盐母液时
3、，FeS0 4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于磁 力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min)，调pH值至5 .5,室温 放置冷却后，再冷藏。使用上述配好的母液，按口稀释倍数，配制基础MS培养液：1 MS大量元素，1 MS微量元素，1 MS维生素和氨基酸，1 MS铁盐， 蔗糖30 g/L ,定容后调节pH至5.8 ,高温高压灭菌。固体培养基含植物凝胶3.5 g/L或琼月旨9 g/L。另 MS 基本培养基可用 Murashige and Skoog Basal Salt Mixture （Sigma-Aldrich）快速配制。播种方法：将烟草种子在自然条件下进行浸种
4、处理 （无菌水中浸泡100h）,自然晾干后 依次用7SB （ 70%）和汞（0.1%）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤 3-5次， 彻底清除残留于种子表面的汞。将消毒后的种子在无菌条件下播于 MS固体培养 基上，放入（25 i2）C的光照培养箱中培养。培养30d后取样测定。精品资料配制培养液：1 .溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂 9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸储水750 mL ,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸储水定容至1 000 mL ,搅拌均匀2 .需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基
5、的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤3 .调pH用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中， 边滴边搅拌，一直到培养基的pH为5.84 .培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶 （50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。高压灭菌培养基
6、的高压灭菌包括以下几个步骤。第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中， 再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐， 可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸储水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶 （以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镣子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在 98 kPa、121.3 C下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。Welcome ToDownload !欢迎您的下载，资料仅供参考！
