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固相凝集法.pdf

1、血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法) 中心血站 医院血库及输血科 妇幼保健医院 器官移植中心 . 组成: 应用单位: 应用范围:1 抗原检定 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 阴性反应 含已知特异性抗体的血清或试剂 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 待检测血小板 2 抗体检测 2.1 同种异型或同种抗体检测 2.1.1 检测流程 血小板筛检(谱)细胞 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 阴性反应

2、 患者血清/血浆 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 2.1.2 抗体鉴定用血小板谱细胞图谱(冻干制品) HPA-1a HPA-1b HPA-2a HPA-2b HPA-3a HPA-3b HPA-4a HPA-4b HPA-5a HPA-5b HPA-15a HPA-15b 1 2 3 4 5 6 7 8 2.2 自身抗体检测 2.2.1 自身结合抗体检测 患者血小板 反应板 (已包被血小板单抗) 50g,5min离心 洗涤3

3、次 50l/孔 阳性反应 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 阳性 阴性 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 阴性反应 2.2.2 自身游离抗体检测 患者血小板 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 阴性反应 患者血清/血浆 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 2.3 药物依赖性抗体检测 血小板筛检(谱)细胞 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 阴性反应 患者血

4、清/血浆 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 药物 (终浓度100U/ml)注意事项: 1 血清或血浆样本:离心(3000rpm,5 min)后取上清进行检测。 2 血小板悬液的制备(3种方式): 2.1 冻干血小板:用生理盐水溶解。 2.2 机采血小板:用生理盐水进行5-10倍稀释。 2.3 抗凝全血中提取血小板:采血当天8h内EDTA或枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10min后, 取上层2/3富血小板血浆(PRP)直接使用。

5、自身免疫性血小板减少症患者在进行自身结合抗 体检测时应将上述PRP 3000rpm离心10min,弃去上层部分血浆并将血小板浓度调节至 50150 10 9 /L 。 血小板悬液应贮于聚丙烯或聚乙烯试管中(不可采用玻璃试管),20-25保存并在8h 内进行检测。 3 洗涤过程中须轻缓滴加洗液,否则水流剧烈冲击会造成血小板单层破坏导致错误结果。 2.4 HLA-I类群反应性抗体(PRA)检测 O型健康人血小板 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 阴性反应 患者血清/血浆 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 3 交叉配型 供血者血小板 反应板 (已包被血小板单抗) 血小板单层 阳性反应 受血者血清/血浆 抗人IgG 指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 50g,5min离心 洗涤3次 50l/孔 洗涤5次 水浴30min 阳性 阴性 50l/孔 各50l/孔 200g,5min离心 200g,5min离心 阴性反应 长春博德生物技术有限责任公司

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