1、从动物组织提取基因组DNA 一、材料哺乳动物新鲜组织。二、设备移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L TrisCl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA 。2、其它试剂：10% SDS， 蛋白酶 K (20mg/ml 或粉剂)， 乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) ，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。四、操作步骤: 1. 切取组织5g 左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml 分离缓冲液。3. 加1ml 10%
2、 SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。4. 加50ul 或1mg 蛋白酶 K, 37 保温1-2 小时, 直到组织完全解体。5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm 离心数秒钟。6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) 抽提。待分层后,3000rpm 离心 5 分钟。7. 取上层水相至干净离心管, 加2 倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。8. 移去上层乙醚,保留下层水相。9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2 倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20 分钟， DNA 沉淀形成白色絮状物。10. 用玻棒钩出DNA 沉淀,70% 乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE 中,-20保存。11. 如果DNA 溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm 短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5l RNaseA(10g/l), 37保温30 分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10 重沉淀DNA。
