1、各种标本的留取方法,标本类型,血液 尿液 粪便 痰及上呼吸道标本 脑脊液 浆膜腔积液 胆汁 脓性分泌物,血液标本,采血指征,患者出现一下体征时可作为采血的重要指征： 发热（ 38 ）或低温（ 36 ），寒战 白细胞增多（计数大于10，000109/L,特别有“核左移”未成熟的或杆状的白细胞），粒细胞减少（成熟的多核白细胞小于1000 109/L ），血小板减少， 皮肤粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸加快 或同时具备上述几种体征应采血培养 对入院危重患者未进行系统性抗生素治疗之前，应及时采集血培养,皮肤消毒程序,70%酒精檫拭静脉穿刺部位待30秒以上 1%-2%碘酊作用30
2、秒或10%碘伏作用60秒，从穿刺向外以1.5cm-2cm直径画圈进行消毒 70%酒精脱碘 （对碘过敏的患者，用70%酒精消毒60秒，带酒精挥发干燥后采血）,培养瓶消毒程序,用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒 用无菌纱布或棉签清除橡皮塞表面酒精，然后把血液注入培养瓶。,静脉穿刺和培养瓶接种程序,在穿刺前或穿刺期间，防止静脉滑动，带无菌乳胶手套固定静脉，如行第二次穿刺，应换针头。 用注射器对成人不同部位穿刺取血，勿换针头直接注入血培养瓶，或严格按厂商推荐方法采血。 血样接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀防止血液凝固。 用70%酒精清洁皮肤穿刺部位去除残留碘。在皮肤上避免使用胶粘剂或不透气的敷料。
3、 立即送检，勿冷藏。,采血量,成人：8-10ml 儿童：1-5ml 一般血液标本与培养基比例为1：10为宜,采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行，在24h内采集2-3份血培养。 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5-1h采集，或在寒战或发热后1h进行。,对特殊的全身性和局部感染患者采集血培养的建议,怀疑急性原发性菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎及肺炎的患者，应立即采集2或3份进行血培养。 不明病原的发热，如隐形脓肿、伤寒热和波浪热，先采集2或3份以上。 怀疑菌血症或真菌菌血症，但血培养持续阴性，应改变血培养方法，以获得罕见的（或苛氧的）微生物。 对急性心内膜炎患者，在1-2h内采集
4、3份血培养，如果24h后阴性，在采集3份以上的血培养。入院前两周内接受抗生素治疗的患者，连续三天，每天采集2份。,标本运送,采血后应立即送检，如不能立即送检，需室温保存或置3537孵箱中，切勿冷藏。 自动连续监测系统虽有允许延迟上机监测微生物生长的原理，还是应该尽量减少延迟上机时间。,尿液标本,采集时间及送检,通常应采集晨起第一次尿液送检，原则上应选择在抗菌药物应用之前采集。尽量采集晨尿，因为经过膀胱的夜间孵育，细菌量会增加。对于无症状的病人应连续三天晨尿送检。不要因想得到病人的自排尿而强迫他们摄入过多的水分，额外的摄入会稀释尿液并有可能使细菌计数降至105CFU/ml以下尿液标本采集后应在2
5、h内进行培养，否则应置4-8 冰箱冷藏保存，经冷藏的标本尽量在8h内进行接种。,标本采集,Midstream voided urine (中段尿) 肾盂尿采集法 膀胱穿刺术,中段尿,临床上最多采用的方法 简单易行，无感染的危险 这种方法不适合厌氧培养，因在尿道及周围有许多厌氧菌存在，有污染可能,女性患者,先以肥皂水或以1：1000高锰酸钾水溶液冲洗外阴部及尿道口 再用灭菌水清洗 最后用灭菌纱布擦拭 排尿弃去前段尿，留取中段尿10ml左右于无菌容器内加盖送验 采集中段尿最好由专门护士采集，以减少污染。,男性患者,先用肥皂水清洗尿道口 再用清水冲洗后留取中段尿 包皮过长者为防止包皮内细菌的污染，将
6、包皮翻开冲洗后再留取中段尿。,儿童患者,采集中段尿较困难 如尿中细菌明显增多，可高度怀疑urinary tract infection(尿路感染)， 无细菌则可否定 细菌数居中时，有必要用导尿或膀胱穿刺术采集尿液。,肾盂尿采集法,确定bacteriuria(菌尿)是否来自肾脏，可通过膀胱镜，输尿管插管采集左、右肾盂尿。,膀胱穿刺术,采用耻骨上膀胱穿刺术取尿 一般用于anaerobe培养，故在取得尿液后，针头插于无菌橡皮塞上立即送检 一般应用于新生儿、幼儿以及中段尿培养阴性又怀疑泌尿系感染的患者。,便标本,临床问题,人体肠道中的细菌种类和数量繁多，健康人肠道内常见细菌有无芽孢厌氧杆菌（如拟杆菌等
7、）、大肠埃希菌、产气肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪产碱杆菌、枯草杆菌、棒状杆菌、葡萄球菌、肠球菌及酵母菌、念珠菌属等，这些细菌在肠腔内通常是不致病的。引起腹泻的病原菌有致病性大肠埃希菌、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属、爱德华菌属、弧菌属、弯曲菌属、厌氧芽孢杆菌属等。,临床问题,腹泻是我国的常见病、多发病，其中多数是属于感染性腹泻。感染性腹泻是一大类发病急、传播快、危害广的常见感染性疾病，轻者表现为轻度腹泻，重者可造成患者脱水、败血症甚至死亡。因此及时、准确地检出致病微生物，对于发现传染源、控制疾病流行及有效治疗腹泻病患者都有着重要的意义。,临床问题,不同地区、不同年龄的患者感染性腹泻的病因
8、存在着一定的差异。腹泻病原菌监测结果显示非沙门菌、志贺菌性腹泻日益增加。目前随着抗生素的广泛应用，影响到了肠内细菌微生态平衡，出现抗生素相关性结肠炎等。不同的致病细菌引起患者的临床症状不尽相同，患者的治疗方案也存在着差异，因此粪便细菌培养结果对于提高临床治疗针对性，促进抗菌药物的合理应用起着重要作用。,送检指征,当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议送检粪便细菌培养， 粪便涂片镜检白细胞5/HP存在，提示患者为志贺菌、EIEC等细菌引起的侵袭性腹泻 重症腹泻 体温大于38.5 血便 便中有脓液 未经抗生素治疗的持续性腹泻患者 来自疫区的患者。,标本的采集,标本采集应争取在发病早期和使用抗菌药物治
9、疗之前 自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便（2-3g）。液体粪便则取絮状物，一般取1-2ml，直接装入无菌便盒或保存液或转运培养基中送检 直肠拭子采集粪便标本，常适于排便困难患者或婴幼儿。常用肥皂水将肛门周围洗净，用无菌盐水、保存液或增菌液湿润的棉拭子插入肛门，成人约4-5cm,儿童约2-3cm, 与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将拭子植于适当的运送培养基内。,标本的采集,直肠指诊时，亦可从手套上获得标本，及时送检 容器应是无菌、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不应加入防腐剂,粪便细菌培养标本验收标准及处理方法,标本运送,粪便标本应于1h内送检，如不能及时送
10、检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基中，但不宜超过24h。 直肠拭子采集的标本必须插入合适的转送培养基中送检，转运时间不宜超过2h。 高度怀疑霍乱弧菌感染时，标本送至专门实验室复检时，必须妥善包装，防止溢漏，由专人负责，送检容器用后必须经过消毒处理。,呼吸道标本,标本采集,自然咳痰法 支气管镜采集法 胃内采痰法 气管穿刺法 小儿取痰法 上呼吸道标本,自然咳痰法,患者清晨起床后，为减少口腔正常菌群的污染，用清水反复嗽口后用力咳出第一口痰于无菌容器内 对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入加温至45的10%NaCl水溶液，使痰易于排出 对痰量较少的小儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽 收集
11、痰后立即送检，以防某些细菌在外环境中死亡,支气管镜采集法,用支气管镜采集法在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取得标本 该方法对患者有一定痛苦，不易被接受,胃内采痰法,无自觉症状的慢性结核病人, 尤其婴幼儿有时将痰误咽入胃内 可采集胃内容物，做结核杆菌培养，其阳性率比咳痰高10%左右 以清晨空腹采集胃液为好,气管穿刺法,通过气管穿刺取得痰，此方法主要用于厌氧菌培养,小儿取痰法,用弯压舌板伸向舌根部压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物，粘在拭子上 立即送检,上呼吸道标本,通常用无菌棉拭子，取咽后壁或腭垂的后侧,注意事项,采集后应立即送检，以防某些细菌在外环境中
12、死亡。 作结核杆菌检查，痰量要多或留取24小时痰液，婴儿肺结核要用胃管取痰 约有1/4-1/2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时作血培养。,脑脊髓液标本,正常人体中，均为无菌的，细菌侵入该部位，会引起这些部位的感染。,标本采集,通过腰椎穿刺术以无菌手续收集CSF 3-5毫升于无菌小瓶或无菌试管中 一般采用第二管CSF用于微生物的培养。收集CSF后在常温下15分钟内必须送到实验室 如果CSF量足够的话，可以3000 rpm离心15分钟取沉淀物进行接种,注意事项,CSF切勿放入冰箱，否则会使致病菌死亡。尤其是肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、嗜血杆菌 当CSF收集量较少时，应首先做微生物学检查，再做其他检
13、查，以免标本被污染。 应在用抗菌药物之前采集CSF,浆膜腔积液标本,浆膜腔通常是无菌的 多因浆膜腔发生循环障碍、炎症、癌侵润等病变，腔内液体渗漏增加所致,标本采集,临床医师在无菌操作下穿刺抽取，取5-10ml于无菌小瓶中，同时加入109mmol/L 枸橼酸钠1：10体积，充分混匀后立即送检。,胆汁标本,标本采集,十二指肠引流法 胆囊穿刺法 手术采集法,十二指肠引流法,在无菌操作下用引流管作十二指肠引流采集胆汁，所采集的胆汁分A、B、C三部分 A液来自胆总管，为橙黄色或金黄色 B液来自胆囊，为棕黄绿色 C液来自肝胆管，为柠檬色 因插管时通过口腔，可混入口腔的正常菌群。一般以B液作菌培养的意义较大
14、,胆囊穿刺法,行胆囊照影术时，可同时采集胆汁，此法采集的胆汁不易被污染适宜作细菌培养。,手术采集法,在进行胆囊或胆管手术时可直接穿刺采集胆汁,注意事项,由于厌氧菌在感染中占有较大比例，在作需氧培养的同时应考虑到作厌氧培养 标本采集后应立即送检,脓性分泌物标本,标本采集,开放性感染和已破溃的化脓灶 感染与体腔或外界相通的部位 闭索性脓肿,开放性感染和已破溃的化脓灶,标本采集前先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，再用无菌针管或注射器吸取脓性分泌物 慢性感染 如污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下层的组织，经研磨匀浆后分离培养 瘘管内脓液 用灭菌棉拭子挤压瘘管弃取前端脓液后用灭菌容器收集脓汁，并注
15、意是否有“硫磺颗粒”，（确定有无放线菌）。,感染与体腔或外界相通的部位,眼结膜脓性分泌物 先用无菌生理盐水冲洗眼部，用灭菌棉拭子拭干，再用灭菌棉拭子采集分泌物。分泌物较多时，用灭菌棉球擦拭，再用灭菌棉拭子取结膜囊分泌物 耳、鼻、喉脓性分泌物 耳、鼻、喉拭子采集时易被粘膜上的正常菌群污染，所以采集标本时应尽量避免与周围粘膜接触。 生殖道分泌物 男性应冲洗尿道口，采集从尿道口溢出的脓性分泌物或用白金耳棉拭子插入尿道内24厘米处取分泌物。女性则用窥器扩张阴道，用无菌棉拭子可根据临床需要采集阴道、宫颈、宫内分泌物。,闭索性脓肿,主要指皮肤化脓（毛囊炎、疖、痈）和皮下软组织化脓感染 用2.5%碘酊和75%酒精消毒周围皮肤后，穿刺抽取脓液或分泌物送检 疑为厌氧菌感染时，取材后立即将注射器内空气排空，将针头插入灭菌橡皮塞内，以防空气进入，及时送检,注意事项,尽可能在应用抗菌药物之前采集标本 采集标本时应注意分泌物的性状、色泽和气味 深部和粘膜附近的感染应同时做需氧培养和厌氧培养 标本采集后应及时送检,谢 谢,
