1、FastStart Universal SYBR Green Master(ROX) 注意nullnull使用指南null简易版，在实际使用时请查阅null式英文说明书null 1. 产品概述产品概述产品概述产品概述 产品null述产品null述产品null述产品null述 FastStart Universal SYBR Green Master(ROX)null即用型null2浓度的反null混和液，null产品包含了基于SYBR Green I检测模式的qPCR和两null法qRT-PCR进行实时DNA检测时所需的所null试剂(除了引物null模板)nullnull试剂内含参比染料RO
2、X，适用于所null需要ROX校null的实时荧null定nullPCRnullnullnull 储存条储存条储存条储存条件nullnull稳定性件nullnull稳定性件nullnull稳定性件nullnull稳定性 null产品在-15-25C条件nullnull稳定存放至标签null的null效期之前null若存放于+2+8C条件null，则null短期储存nullnull超过1个nullnullnull 注意null请将null产品避null保存null 请避免将null产品反复冻融null null反null液添加引物null模板nullnull在+15+25Cnull避null条件
3、null稳定储存24小时null null产品用null冰运输null 2. 产品使用方法产品使用方法产品使用方法产品使用方法 2.1 实验前准备实验前准备实验前准备实验前准备 实验最佳反null条件(包括DNA模板和PCR引物浓度null孵育温度和时间null循null次数)nullnull据特异性模板/引物而异null null本准备null本准备null本准备null本准备 请使用纯度null浓度null优化摸索且null含PCR抑制物的DNA模板(如，基因组学或null粒DNA，cDNA)nullnull获得高重复性的null酸分离产物，请使用以null试剂null - MagNA P
4、ure LC或MagNA Pure Compact系统结合系统配套的null酸分离试剂null用于null酸自动分离null - 手动分离请使用High Pure Nucleic Acid Isolation Kitnull 更多null细信息，请阅读罗氏null用null学部生化产品目录，或nullnull罗氏null用null学部null页 www.roche-applied-. 请使用至多250 ng基因组DNA或50 ng cDNAnull 请将DNA模板储存于PCRnull别的水中或5 10 mM 的Tris/HCl(pH 7.5-8.0)中null由于EDTAnull镁离子会形nu
5、ll敖合物，故请避免将模板溶解于TE缓null液null 引物引物引物引物 PCR引物的最终浓度null0.1 0.4 Mnull建议初次试验时null种引物的浓度null0.3 Mnull 注意null实验中使用的引物对浓度相等null PCR引物的nullnullnull定了扩增子长度null熔解温度null扩增效率null产nullnull引物nullnullnull时也nullnull于PCR程序的选择(两null法nullnullnull法)null 引物nullnullnull通过实时PCR系统供null商(如，PrimerExpress)提供的相关nullnull程序，或者您nu
6、ll以在网null获null相null的信息(如，Primer3: http:/frodo.wi.mit.edu/)null 如果您想在null续实验中用水解探针检测您的实验结果，请选择熔解温度(Tm)在+58+60C之间的引物null您也null以采用罗氏null用null学部通用探针null提供的预测试的探针来进行验证SYBR Green I检测nullnull通用探针null的探针相对null的PCR引物的nullnull，请参考在线ProbeFinder 软件 null 阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照 null了检测DNA污染物，在阴性对照组中将DNA模板替换nullPCRnull别
7、的水null 反null体null反null体null反null体null反null体null FastStart Universal SYBR Green Master (ROX)适用于多种nullnull体null的反null体系，反null中使用的反null管/板null合适的反null液体null，请参考nullnull仪器供null商的建议null 内参染料内参染料内参染料内参染料ROX 原则null，实时PCR系统(除LightCycler系统外)提供了两种nullnull的检测方法null 结合内参染料(通常nullROX)的检测来校null各管SYBR Green I荧null
8、信号null 单独检测SYBR Green I荧null信号null 检测方法的选择nullnull于所用仪器(如，是否nullnull检测内参染料荧null信号的通道)null仪器null源(卤素灯或激null)null 含ROX内参染料的FastStart Universal SYBR Green Master被证实无需调整nullROX的浓度即null用于ABI仪器(ABI PRISM 7000 测序系统nullABI 7300 实时PCR 系统nullABI 7500 实时PCR 系统nullABI 7700 测序系统以nullABI PRISM 7900 HT 快速实时PCR系统)，
9、也null用于Stratagene Mx3000P QPCR 系统null 注意null如果您null使用实时PCR系统的参比通道或您的系统null配备参比通道，请选择FastStart SYBR Green Master (without ROX)null 如果您使用Bio-Rad iCycler iQ5 实时PCR检测系统，请选择Universal SYBR Green Master (without ROX)，并参考Bio-Rad iCycler iQ5 实时PCR检测系统指导手null进行External Well Factor Platenull骤以检测孔道因子null 2.2 实验
10、null骤实验null骤实验null骤实验null骤 PCR反null液的准备反null液的准备反null液的准备反null液的准备 以null操作null50 l 反null体系，如使用null他体系请作相null修改null null骤null骤null骤null骤 操作操作操作操作 nullnullnullnull null了使试剂最大程度地保证实验结果，在打开之前null将null融解，并于微型离心机null轻微离心null 用移液枪吹打混匀溶液null冰null保存null 注意null如果您使用的是5-ml或50-ml瓶装的FastStart Universal SYBR Gree
11、n Master(ROX)，请将小瓶nullnull翻转数次(请勿剧烈摇动)null nullnullnullnull 准备100浓度的PCR引物溶液(30 M)null nullnullnullnull 将反null管置于冰null， 在50-l的单个PCR反null体系中，依次加入null表中的反null液组分null 试剂试剂试剂试剂 体null体null体null体null 最终浓度最终浓度最终浓度最终浓度 FastStart Universal SYBR Green Master(ROX) 25.0 l 1 null向引物(30 M) 0.5 l 300 nM 反向引物(30 M)
12、0.5 l 300 nM 水，PCR等null 19.0 l 总体null总体null总体null总体null 45 l 注意null如果需要准备多次反nullPCR混合液，请将null述各组分体null按照z倍做准备(z=反null数+1)null nullnullnullnull 用移液枪将混合液小心混匀，请勿漩涡null 移null45 l PCR混合液至PCR反null管或PCR 微板孔中(nullnull于您的实时PCR系统)null nullnullnullnull 加入5 l DNA模板(null超过250 ng 基因组DNA或50 ng cDNA)null 注意null在初次试
13、验中null了获得cDNA模板的最优模板null，将未null稀释，1: 10稀释，1: 100稀释的cDNA模板进行null行对照实验null 用移液枪小心混匀null nullnullnullnull null据仪器的指导手null处理PCR管或PCR微板(如， 使用透null的PCR管盖或用自null箔封nullPCR板)null PCR PCR扩增程序nullnullnull很多种，两null法nullnullnull法都能产生比较理想的实验结果null如采用两null法，选择长度较短的扩增子(nullnull150 bp)，且退火延长温度nullnull+60C(如，null型的PC
14、R反nullnull95Cnull形15s，60C条件null退火并延长1分钟，通常完null40个循null)null null了得到最佳结果，请确认所使用的仪器已校准过，并将实时PCR循null仪中检测通道null置在SYBR Green 或 FAM(如，530nm)null null表null标准PCR流程的例子null 注意null如果您使用配nullFastPlate的ABI系统(如，ABI 7500 快速实时PCR系统或ABI PRISM 7900 HT 快速实时PCR 系统)进行20-l反null体系的快速qPCR流程，请null据括号中的提示进行操作，循null时间nullnu
15、ll至1小时null 请参考您的仪器供null商提供的操作手null，并null据以null参数进行操作null 循null数循null数循null数循null数 分析模式分析模式分析模式分析模式 目标温度目标温度目标温度目标温度 持续持续持续持续时间时间时间时间 备注备注备注备注 1(null选) 无 +50C 2分钟 如果反null液中加入了UNG酶以防null交null污染 1 无 +95C 10分钟 激活FastStart Taq DNA 聚合酶 无 +95C 15null(10null*) nullnullnullnull 40 定null null据引物而定(null型null60
16、null(30null*) 扩增null实时分析 +58+60C) *null快速qPCR的持续时间null nullnullnullnull 将PCR管或PCR板放进仪器开始反nullnull nullnullnullnull 在反null结束null，null据仪器的定nullnull熔解曲线分析操作指南进行结果分析null 2.3 相关null骤相关null骤相关null骤相关null骤 防null防null防null防null交null交null交null交null污染污染污染污染 UNG酶null防null PCR 过程中的交null污染nullnull技术过程包括在扩增中加入脱氧尿
17、苷null磷酸null(dUTP)进行产物扩增，在以null的扩增反null中加入UNG并进行高温预处理null如果在null面的PCR反null液中出null含nulldUTP的前次扩增污染物，UNG会将污染物降解，从而失去被null扩增的能力而无法nullnullPCR模板null由于目标DNAnull含dUTP，因nullnullnullUNG影响null dUTP 是FastStart Universal SYBR Green Master(ROX) 中的null分null 注意null防null交null污染的null骤需要用到LightCycler Uracil-DNA Glyco
18、sylasenullnull50-l PCR 反null加入1.25 2.5 Unull 两null法两null法两null法两null法RT-PCR FastStart Universal SYBR Green Master(ROX)也null用于两null法RT-PCRnull在两null法RT-PCR中，RNA反转录nullcDNA是null在实时PCR仪器null进行的独立于null它反null的null骤null利用cDNA 作null起始null本材料来进行null续的扩增null在线null测需null据实时PCR标准流程操作nullnull们建议您使用Transcriptor
19、First Strand cDNA Synthesis Kit 进行RNA的反转录，cDNA 合null的null体操作请参考相关说明书null 3. 相关产品nullnull信息相关产品nullnull信息相关产品nullnull信息相关产品nullnull信息 产品nullnull产品nullnull产品nullnull产品nullnull 包装包装包装包装 目录号目录号目录号目录号 FastStart SYBR Green Master 41.25 ml 105 ml 04 673 484 001 04 673 492 001 FastStart Universal Probe Mast
20、er(ROX) 21.25 ml 101.25 ml 105 ml 150 ml 04 913 949 001 04 913 957 001 04 914 058 001 04 914 066 001 FastStart TaqMan Probe Master 21.25 ml 101.25 ml 105 ml 04 673 409 001 04 673 417 001 04 673 433 001 FastStart TaqMan Probe Master (ROX) 2.5 ml(21.25 ml) 12.5 ml(101.25 ml) 50 ml(105 ml) 04 673 450 0
21、01 04 673 468 001 04 673 476 001 Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 50 reactions, including 10 control reactions 100 reactions 200 reactions 04 379 012 001 04 896 866 001 04 897 030 001 LightCycler Uracil-DNA Glycosylase 100 U 03 539 806 001 HighPure PCR Template Kit for 100 purifications 11 796 828 001 Preparation Kit Water， PCR-grade 25 ml(25 vials of 1 ml) 25 ml(1 vial of 25 ml) 100 ml(4 vials of 25ml) 03 315 932 001 03 315 959 001 03 315 943 001
