1、1多聚甲醛 4%多聚甲醛配置4%多聚甲醛配置： （4%是指 4g 多聚甲醛固体溶于 00mL PBS 中） 1. 先配好 PBS 2. 称取 4g 多聚甲醛固体 3. 将多聚甲醛放入 PBS 中水浴锅 65加热 3h 注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。 2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩 40g 多聚甲醛固体1L PBS 120g 多聚甲醛固体3L PBS 药品 PBS NaCl KCl Na2HPO4 12H2O KH2PO4 加三次水，1L 定容 取 50 只小鼠，1 只小鼠注射 20mL 4%的多聚甲醛溶液，共需 10
2、00mL，故要配置 1、5L 的 4%的多聚甲醛溶液 用量 1L 8g 0.2g 2.88g 0.2g 从组织中提取总蛋白 组织匀浆 8mL 裂解液8mL RIPA+80L PMSF（100）2+190.5Lcocktail（100） 1mL RIPA+10L PMSF（100）+23.8Lcocktail（100） 1. 裂解：取少量组织 +600L 裂解液匀浆4振荡裂解45min4离心 12000r/min，离心 15min 2. 稀释：取 3L 上清+27L 无菌水 BCA 试剂盒 以A 液：B 液 =50：1 的比例混合样品 25L+混合液200L（设置三组平行对照） 温敷：37下温敷
3、30min570nm 下检测 OD1.0 左右测蛋白浓度，计算 50g/70g 对应体积和 buffer 体积5buffer，最大上样量4=buffer 体积 3. 变性：100煮沸 10min，-80保存 组织总 RNA 提取 取小鼠肝组织 50100mg,加人 1mL TrizolTM 试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过 TrizolTM 的 10%。匀浆后的样本于室温孵育 5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人 0.2mL 氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡 15s 后室温静置3min；4下,12000r/min 离心 15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。RNA 分布于上层水相,水相占总体积 60%。取上清液转人另一样品管,3并加人 0.5mL 异丙醇,混匀后室温放置 10min；4下,12000r/min 离心 10min。弃上清液,并用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的双蒸水(ddH20)配置的 75%乙醇 1mL 洗涤沉淀物,振摇后沉淀。然后在 4下,7500r/min 离心 5min。真空干燥 510min 或吸尽乙醇开盖挥发,弃上清液，敞开关口,凉干沉淀;最后溶沉淀于 50uL RNase-free ddH2O 中。-70保存。 百度搜索“就爱阅读”,专业资料、生活学习,尽在就爱阅读网 ,您的在线图书馆!
