1、1. 决定摇瓶溶氧量的因素有哪些？它们如何影响摇瓶溶氧量？2. 采用磷钼蓝法测定发酵液中的植酸酶活性实验中，空白对照中并未发生酶和底物的水解反应，但经过显示后，颜色却呈较深的蓝色，试解释其原因。答：磷钼蓝作为显色液，是需要现配现用的，因为磷钼蓝比较容易被氧化，产生蓝色还原物。当对样品和空白对照进行水浴显色时，空白对照因为受热，被氧化的程度深，所以空白对照中并未发生酶和底物的水解反应，但经过显示后，颜色却呈较深的蓝色。3. 红曲米发酵实验中，为何要添加酸水？无菌酸水如何制得？答：此题课堂上未讲4. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，为何选用植酸钙而不选用植酸钠？因为在植酸盐为产植酸酶黑曲霉的唯一磷来源
2、，将植酸钙加入培养基中，可以使培养基变得混浊，待植酸钙被利用后会产生较明显的透明圈，以便从透明圈中分离出产植酸酶黑曲霉，而用植酸钠则不会产生透明圈5. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，为什么不将脱氧胆酸钠溶液和氯霉素眼药水加入到筛选培养基中一起灭菌？答：氯霉素眼药水是由特定的厂家生产的，在生产过程中就已经进行了灭菌，另外氯霉素本身就具有杀菌作用，所以在试验中不需要灭菌；脱氧胆酸钠会与培养基中的铁盐成分在高温时发生反应。6. 请详细说明产植酸酶黑曲霉的分离实验的实验原理。答：利用透明圈法，提供唯一磷源，设计筛选培养基从样品中分离目标微生物产植酸酶黑曲霉7. 产植酸酶黑曲霉的摇瓶发酵实验中，摇瓶的作用
3、有哪些？答：1、气体和营养分布均匀 2、温度保持恒定，不会出现局部高低温 3、代谢产物分散 4、避免影响其他菌丝生长8. 植酸酶酶活力测定实验中，若显色后的反应体系测定吸光度值为 2.23，说明什么问题？该如何调整 实验方案？答：这种现象说明了待测物的浓度过大，调整方案是稀释待测物9. 植酸酶酶活力测定实验中，做标线的目的是什么？因素摇瓶的透气性 摇床的转速 培养基的粘稠度影响摇瓶中的氧气主要是通过封瓶的 8 层纱布进入，纱布的透气性越好，摇瓶的溶氧量就越大摇床通过转动，带动培养基翻滚流动，转速越大，培养基的流动越剧烈，越增大了气体与培养基的接触面积，从而增大溶氧量培养基的粘稠度越大，氧气越难
4、以进入，溶氧量越低答：标线是反应吸光度与无机磷浓度之间的关系，从而使得我们测了样品的吸光度后即可在标线上读出无机磷浓度，进行酶活力的计算10. 简述灭菌锅的使用方法及步骤。答使用方法：1、向灭菌锅内注水至三脚架上边缘 2、打开灭菌锅进行预热 3、放入内锅，再待灭菌物整齐排放在锅内4、把排气管捋直，放入排气槽内，盖上盖子5、螺栓对应拧紧，打开开关，加热6、待压力达到 0.05Mpa，进行排冷空气，压力归零时，在加热，反复两次后维持温度在指定的温度指定时间7、自然降温或排气降温，11. 试述试管棉塞的详细制作步骤。答：12. 试述锥形瓶棉塞的详细制作步骤。与 11 一样13. 试述发酵瓶棉塞的详细
5、制作步骤。取 8 层纱布直接塞在瓶口内整理纱布，使得纱布与瓶壁的接触处无折痕即可14. 试述平板接种试管斜面的详细步骤。工具的灭菌及手、试管斜面、平板和工作台等的消毒点燃酒精灯，再把手消毒，在酒精灯旁打开平板和试管塞，用接种环在平板上取一环菌丝接种到斜面上，盖上平板，塞上试管塞适宜条件培养15. 试述摇瓶种子接种发酵瓶的详细步骤。工具的灭菌及手、摇瓶种子、接种发酵瓶、工作台等的消毒点燃酒精灯，再把手消毒，在酒精灯旁打开瓶塞，用移液管从种子瓶量取适量的菌液接种到发酵瓶中盖上瓶塞适宜条件培养16. 试述斜面孢子接种摇瓶的详细步骤。工具的灭菌及手、斜面、摇瓶、工作台等的消毒点燃酒精灯，再把手消毒，在
6、酒精灯旁打开无菌水试管塞和斜面试管塞把无菌水加入斜面中，盖上塞子，震荡在酒精灯旁，打开摇瓶塞和斜面塞用移液管从斜面中吸取适量的孢子液，注入摇瓶中，盖上塞子适宜条件培养17. 植酸酶酶活力测定实验中，样品罐与空白罐的加样顺序有何不同？为什么不同？答：样品管和空白管加样主要是 TCA 和植酸纳的顺序相反;因为 1、保证空白管和样品管加样相同 2、避免空白管中的酶液与底物反应18. 植酸酶酶活力测定实验中，Vc、植酸钠和 TCA 的作用各是什么？Vc：显色液的主要成分之一，作为还原剂；植酸纳：作为酶反应的底物；TCA：终止反应19. 所培养的平板有没有可能得不到菌落？如果没有得到菌落，怎么办？答：有
7、可能解决方法：1、对样品进行富集 2、取稀释倍数低的稀释液20. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，平板中为什么要加入 1%脱氧胆酸钠溶液？答：抑制黑曲霉菌丝的疯长，使黑曲霉菌落分明21. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，氯霉素注射液或氯霉素眼药水为何不需要灭菌，加入有何作用？氯霉素眼药水是由特定的厂家生产的，在生产过程中就已经进行了灭菌，另外氯霉素本身就具有杀菌作用，所以在试验中不需要灭菌作用:抑制杂菌的生长22. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，经过一次分离的菌种是否为纯种？若不纯，应采用那种分离方法最合适？答：不确定是否是纯种分离方法：稀释涂布平板发23. 简述黑曲霉纯种培养操作过程中的关键无菌操作技术。答：工具灭菌，用品消毒选择单菌落酒精灯火焰旁接种培养24. 黑曲霉斜面划线是划曲线还是划一条直线？为什么？答：是一条直线;因为黑曲霉菌丝的蔓延能力非常强25. 试举例说明摇瓶培养技术的应用。答：列：食用菌液体菌种的制备摇瓶培养是通过摇动发酵瓶，控制温度、溶氧量等，使营养物质均匀，凝结菌丝团，代谢产物分散，从而得到优质菌丝26. 红曲米固态发酵中，为什么每天要将三角瓶摇动 23 次？答：1、摇断菌丝，刺激菌丝快速生长 2 松散培养基，增强透气性 3、控制温度、湿度等
