1、实验 3 食品中维生素 C 含量的测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验原理维生素 C 又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料 2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。2，6-二氯酚靛酚的钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色，因此，可用 2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。二、试剂和器材偏磷酸醋酸溶液：取 15g（用时研细）溶于 40mL 醋酸及 20mL 水的混合液中，然后用水稀释至 500m
2、L，过滤后储入试剂瓶中。标准 2，6- 二氯酚靛酚溶液：取 0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于 700mL 蒸馏水中（用力搅动），加入 300mL 磷酸缓冲液（预先配制 9.078g/L KH2PO4-11.867g/L Na2HPO42H2O 水溶液，用时以 KH2PO4：Na 2HPO42H2O=4：6 的比率将其混合，pH 值为 6.9-7.0），翌日过滤，滤液储于棕色瓶中，临用时，以抗坏血酸溶液标定。标准维生素 C 溶液：以少量偏磷酸醋酸溶液溶解 0.1g 维生素 C 于 100mL 容量瓶中，再以该液稀释至刻度。2，6-二氯酚靛酚液的标定：在 3 个 100mL 锥形瓶中，各置 5mL
3、 偏磷酸醋酸液，再各加 2mL 标准维生素 C 溶液，摇匀。用上面所制的标准 2，6-二氯酚靛酚液滴定，呈玫瑰红色保持 30s 不褪色为止。记下所用 2，6- 二氯酚靛酚溶液体积平均值，再以同样方法做一空白实验，取 7mL 偏磷酸醋酸液加水若干毫升（相当于以上所用的 2，6-二氯酚靛酚溶液的低定量），仍用 2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。将第一次滴定的量减去空白实验的量，即为标准维生素的反应量，求出 1mL 2，6-二氯酚靛酚对应于维生素 C 的质量（mg ）。研钵、容量瓶、剪刀、锥形瓶、微量滴定管三、实验步骤1、用自来水冲洗果蔬样品，再以蒸馏水清洗，用纱布或吸水纸吸干表面水分，然后称取 25g，
4、剪碎，在研钵中研呈浆状。加入 20mL 3%偏磷酸醋酸液，搅动，抽提。过滤液经漏斗流入 100mL 容量瓶中，残渣再以 30mL 偏磷酸醋酸液提取 3 次，滤液及洗涤液皆流入该容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻度，加塞摇匀。如滤液颜色较深，可用白陶土脱色。2、吸取 10mL 提取液于锥形瓶中，加 5mL 偏磷酸醋酸液，混合均匀，以 2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，并不断摇动，至溶液呈玫瑰红色保持 30s 不褪色为止。3、吸取 15mL 偏磷酸醋酸液，加水若干毫升（相当于以上样品实验滴定所用 2，6-二氯酚靛酚溶液的量）做一空白实验，用同样方法，以 2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。4、结果计算维生素 C 的含量
5、（mg/100g）按下式计算： mcv*102）（的 含 量维 生 素 式中 v1样品用 2，6-二氯酚靛酚溶液的滴定体积，mLV2空白用 2，6-二氯酚靛酚溶液的滴定体积，mLC1 mL 2，6-二氯酚靛酚相当于维生素 C 的含量，mg/mLm样品质量。四、注意事项1、样品中某些杂质也能还原 2，6-二氯酚靛酚，但速率均较抗坏血酸慢，故终点以淡色存在 30s 为准。2、维生素 C 还可以用 2%草酸溶液来提取，2%草酸和偏磷酸同样具有抑制抗坏血酸氧化酶的功效。3、若样品中含有大量 Fe2+,可以还原 2，6-二氯酚靛酚，用草酸为提取液，则 Fe2+不会很快与染料起作用。五、思考题1、对含有大量色素的样品如何测定其中维生素 C 的含量？
